Цель: изучение этнической и географической принадлежности патогенных штаммов Helicobacter pylori (H. pylori), распространенных в белорусской популяции, и анализ генов, ассоциированных с повышенной патогенностью микроорганизма — vacA, iceA, babA и cagA. С последним связывают онкогенный потенциал H. pylori.

С целью изучения генетического состава H. pylori во всем мире проводятся масштабные исследования, позволяющие оценить региональные особенности генотипа H. pylori, т. к. развитие клинически значимого заболевания зависит в значительной степени от патогенного потенциала бактерии, а не только от восприимчивости макроорганизма и экологических факторов.

Изучение генома H. pylori ведется в основном с целью улучшения понимания патогенеза гастродуоденальной патологии, причин способности этого микроорганизма вызывать заболевание. На данный момент в базе данных генома H. pylori 62 гена отнесены к категории патогенных, т. е. их наличие у бактерии коррелирует с ее патогенностью. Нуклеотидное разнообразие H. pylori и частые рекомбинации между различными штаммами свидетельствуют только о частичном нарушении связи между полиморфными нуклеотидами в генах, что увеличивает содержание информации для генетического анализа.

Для получения бактериальной культуры H. pylori первичный посев биопсийного материала проводили на двух питательных средах: селективной pylori агар «BioMerioux» (Франция) и неселективной питательной среде Мюллера–Хинтона с добавлением 5%-й крови барана. Идентификацию полученных культур проводили тестированием бактерий на наличие цитохромоксидазы, каталазы и уреазы. Для определения географических особенностей, этнической принадлежности и характеристики патогенных свойств циркулирующих в республике штаммов H. pylori проводили анализ ДНК методом секвенирования консервативного и вариабельного 3/-региона CagA гена H. pylori с использованием автоматического секвенатора ABI PRISM 310 (Applied Biosystems). Анализировали регион генотипа CagA H. pylori размером 349 н.п. Нуклеотидные последовательности изучаемых нами образцов анализировали с помощью программы Sequence Analysis 5.1.1 и сравнивали с нуклеотидными последовательностями гена 23S рРНК H. pylori из GenBank NCBI в программе CLC Sequence Viewer 6.3. Полученные данные о нуклеотидной последовательности в формате FASTA были использованы для поиска с помощью системы ВLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/). Конечным результатом явилось установление спецификации выявленного продукта путем сравнения с известными последовательностями СagA — гена H. pylori из GenBank NCBI.

Сравнительное изучение генотипов CagA, представленных в белорусской популяции, показало их основную гомологию с Европейской группой. При этом различные варианты, выявленные в Беларуси, имели сходство с генотипами, выявленными в различных регионах мира. Секвенирование вариабельного 3/-региона CagA позволило определить географическую принадлежность патогенных штаммов H. Pylori, распространенных в белорусской популяции в настоящее время.

На следующем этапе проводили изучение вирулентных генотипов сagA, vacA, babA2, iceA1 и ice A2. Изучались 43 препарата ДНК пациентов с хроническим гастритом и 20 препаратов ДНК пациентов с раком желудка, у которых предварительно была выявлена ДНК H. pylori.

Было установлено, что возбудитель чаще выявлялся в биоптатах слизистой оболочки желудка (СОЖ) лиц с хроническим гастритом (86%), чем с раком желудка (62,5%; р=0,014). Микст-штаммы c несколькими патогенными генотипами присутствовали в 75% образцов СОЖ от пациентов с раком желудка. Значимо чаще у лиц с раком желудка выявлялись генотипы babA2 (р=0,013) и ice A1 (р=0,0002), которые являются факторами адгезии и связаны с развитием язв и карциномы желудка.

Таким образом, сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей консервативной части CagA-гена изученных нами штаммов H. Рylori, пред-ставленных в белорусской популяции, показал высокий процент гомологии (98–99%) со штаммами распространенными в настоящее время в Европе, и наиболее всего в Греции, и явное отличие от азиатских штаммов, что характеризуют их этническую принадлежность.

Генетический анализ микст-штаммов c несколькими патогенными генотипами H. pylori показал явное преимущество наиболее агрессивных штаммов H. pylori среди пациентов с раком желудка. Критически оценивая небольшой объем проведенных нами исследований, мы, тем не менее, считаем целесообразным проведение эрадикационной терапии H. рylori как средства профилактики развития аденокарциномы желудка (что согласуется с рекомендациями Азиатско-Тихоокеанского консенсуса).