УДК: 578.74+616.097
Год издания: 2012

Новая технология создания иммуноферментной тест-системы для выявления антигенов энтеровирусов на основе рекомбинантного энтеровирус-специфического полипептида

Амвросьева Т.В.Казинец О.Н.Поклонская Н.В.Хило А.Н.Богуш З.Ф.Дедюля К.Л.
Рубрики: 34.25.1534.25.2376.03.41
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать генно-инженерную технологию получения компонента тест-системы и создать на его основе диагностическую тест-систему для выявления антигенов энтеровирусов методом иммуноферментного анализа»
Сроки выполнения НИР: апрель 2011 г. — декабрь 2013 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Т.В. Амвросьева
Источник финансирования: госбюджет.

Совершенствование эпиднадзора за энтеровирусными инфекциями и лабораторного контроля, как его важной составляющей, является актуальной задачей отечественного здравоохранения. Одним из доступных для практических лабораторий методов выявления энтеровирусов (ЭВ) является иммуноферментный анализ (ИФА), являющийся экспресс-методом клинической лабораторной диагностики и санитарной вирусологии.

Цель: разработка технологии создания современной иммуноферментной тест-системы для выявления АГ ЭВ на основе сконструированного рекомбинантного энтеровирусспецифического полипептида (РЭВП).

Для достижения поставленной цели с помощью генно-инженерных методов был создан РЭВП, изучены его антигенные свойства, оценена возможность использования в качестве антигенного компонента соответствующей ИФА тест-системы.

Созданный РЭВП представляет собой низкомолекулярный полипептид, несущий одну или несколько общих для всех представителей неполиомиелитных ЭВ антигенных детерминант с заданной степенью специфичности. В этом качестве выступил клонированный, экспрессированный и очищенный общий энтеровирусный антигенный эпитоп, расположенный в пределах N-концевой области белка VP3 и C-концевой области белка VP1 вируса ЕСНО 6.

Оценку антигенной активности созданного РЭВП проводили в реакции ИФА по его способности образо-вывать иммунные комплексы с сывороткой, состоящей из пула противоэнтеровируных сывороток к основным серотипам ЭВ группы Коксаки В (1-6) и ЕСНО (1–6, 7–13, 14–24, 15–22, 25–-32), а также с отдельными соответствующими группоспецифическими сыворотками. Образовавшиеся иммунные комплексы выявлялись добавлением антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена, и хромогена тетраметилбензидина.

Установлено, что специфическая антигенная активность РЭВП была сопоставима с таковой цельновирионного АГ, традиционно применяющегося при произ-водстве существующей ИФА тест-системы.

Предлагаемая технология создания рекомбинантной диагностической тест-системы основана на использовании принципов конкурентного метода ИФА, согласно которому РЭВП, сорбированный на поверхности лунок планшетов, конкурирует с ЭВ-агентами за взаимодействие с антителами иммунной сыворотки, которая вносится в лунку одновременно с исследуемой пробой. Выявление образовавшихся иммунных комплексов проводится с помощью антивидового конъюгата, меченного пероксидазой хрена и хромогена тетраметилбензидина. Используя данный принцип, была исследована способность РЭВП конкурировать с АГ вирусных агентов, являющихся основными представителями различных серогрупп ЭВ (ЕСНО 1, 4, 6, 11, 14, 15, 20, 25, 30 и Коксаки В 1, 2, 3, 4, 5), за связывание c антиэнтеровирусными специфическими антителами. Полученные данные указывали на возможность ис-пользования созданного РЭВП в качестве антигенного компонента тест-системы.

Разработанная технология ИФА на основе РЭВП будет использована для создания диагностической рекомбинантной тест-системы для выявления АГ ЭВ в клиническом материале, объектах окружающей среды и пищевых продуктах с последующей организацией производства, полностью обеспечивающего потребности отечественной лабораторной службы. К числу преимуществ создаваемой ИФА тест-системы отно-сятся ее более высокие показатели специфичности, аналитической и диагностической чувствительности, а также стандартизация, технологичность и удешевление процесса производства.


Область применения: санитарная вирусология, эпидемиология.
Рекомендации по использованию: разработанная технология используется для создания рекомбинантной ИФА тест-системы нового поколения для осуществления диагностики ЭВИ и санитарно-вирусологического контроля качества объектов окружающей среды (воды, смывов с предметов) и пищевых продуктов.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь по созданию диагностических ИФА тест-систем на основе рекомбинантных белков.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта