Цель:определить роль гуморальных факторов, продуцируемых клеточным микроокружением, в устойчивости опухолевых лимфоидных клеток к лекарственным средствам в зависимости от механизма их действия и оценить значение этих факторов при определении чувствительности опухолевых клеток к терапии.

В организме клетки опухоли взаимодействуют с ростовыми и антиапоптотическими факторами, продуцируемыми микроокружением органов, в частности клетками стромы костного мозга. При этом микроокружение опухоли играет решающую роль в ее судьбе, и появляется все больше доказательств того, что окружа-ющие стромальные клетки являются одной из главных причин химиорезистентности опухолей, рецидивов новообразований и их неизлечимости.

Таким образом, идея преодоления лекарственной резистентности, обусловленной взаимодействием лейкозных клеток с гуморальными факторами стромы, привлекает все больший интерес, т. к. уничтожение лейкозных клеток, циркулирующих в крови, не решает проблему эрадикации лейкозного процесса.

В проведенных исследованиях мы попытались развить новые представления о механизмах лекарственной резистентности опухолевых клеток и определить роль гуморальных факторов, продуцируемых клеточным микроокружением, в устойчивости клеток опухолевых лимфоидных линий к лекарственным средствам и оценить значение этих факторов при определении чувствительности клеток к терапии.

Для изучения влияния гуморальных факторов микроокружения лейкозных клеток на их чувствительность к химиопрепаратам с различным механизмом действия с клетками Т-клеточного лимфобластного лейкоза культивировали при добавлении этопозида и схемы сочетаний лекарственных средств, которые широко применяются в лечении пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом — COP (циклофосфан + винкристин + преднизолон) и CHOP (циклофосфан + винкристин + преднизолон + доксорубицин). линии MOLT-4 и сублинию MOLT-4/Flb (полученную нами в результате длительного культивирования упомянутой линии с возрастающими концентрациями цитостатического препарата флударабела) в отсутствии и в присутствии сывороточных факторов роста (эмбриональная телячья сыворотка), а также в присутствии среды, кондиционированной мезенхимальными клетками костного мозга, Кроме того, применяли еще два сочетания лекарственных средств с различными механизмами действия — флударабел + винкристин и этопозид + цисплатин. Концентрации лекарственных средств соответствовали терапевтическим.

Чувствительность клеток к лекарственным средствам и их сочетаниям определяли с помощью 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромида (МТТ-тест), который вносили в лунки планшета на последние 4 ч культивирования, общая длительность которого составляла 48 ч. После добавления в лунки солюбилизирующей смеси на плашечном спектрофотометре при длине волны 540 нм оценивали ин-тенсивность окраски, которая с учетом контролей соответствовала процентному содержанию выживших клеток (сохранению дегидрогеназной активности митохондрий).

По данным МТТ-теста, клетки лимфобластоид-ных линий, культивируемых с использованием кондиционированной среды, оказались значительно более устойчивыми к действию лекарственных средств и их сочетаний, чем в условиях отсутствия сывороточных факторов (ЭТС) или даже в их присутствии. Так, для Т-клеточной линии MOLT-4 концентрация этопозида, вызывающая 50%-е ингибирование метаболической активности клеток, оказалась почти в 30 раз выше для клеток в кондиционированной среде, чем для клеток в среде, содержащей или не содержащей факторы роста (рис.). Сублиния MOLT-4/Flb, устойчивая к флударабелу, оказалась также более устойчивой к действию этопозида во всех используемых средах по сравнению с родительской линией MOLT-4.

Сублиния MOLT-4/Flb, устойчивая к флударабелу, оказалась менее чувствительной к действию всех сочетаний химиопрепаратов в условиях кондиционированной среды, чем те же клетки в среде, содержащей или не содержащей факторы роста. Кроме того, клетки MOLT-4/Flb в кондиционированной среде оказались почти в 1,5 раза боле устойчивыми к действию сочетаний химиопрепаратов CHOP, флударабел + винкристин и этопозид + цисплатин, чем клетки родительской линии Molt-4, культивируемой в кондиционированной среде.

Таким образом, обнаружен вклад гуморального фактора естественного микроокружения лимфоидных клеток в снижение чувствительности Т-лимфобластоидных клеточных линий к действию некоторых лекарственных средств, а также к комбинациям лекарственных средств с различным механизмом действия, как к широко используемым в клинической практике, так и к экспериментальным.