УДК: 616.15:615.38
Год издания: 2012

Определение лекарственной чувствительности гемопоэтических стволовых клеток с помощью метода проточной цитометрии

Стежкин А.В.Шман Т.В.Гончарова Н.В.Бакун А.В.Дзюба Е.В.Пасюков В.В.Тарас И.Б.Свирновский А.И.
Рубрики: 76.29.3376.29.4676.29.49
Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий
Тема НИР: «Разработать и внедрить метод подбора адекватной терапии рецидивов опухолевых заболеваний кроветворной ткани после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с целью повышения ее эффективности»
Сроки выполнения НИР: 2011–2015 гг.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А.И. Свирновский, д-р мед. наук, проф., чл.-кор. НАН Беларуси О.В. Алейникова, д-р мед. наук, проф. А.Л. Усс
Соисполнители: ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии», ГУ «Республиканский центр гематологии и пересадки костного мозга на базе 9-й ГКБ»
Источник финансирования: госбюджет.

Цель:разработать методику оценки лекарственной чув-ствительности гемопоэтических стволовых клеток (ГСК).

Сущность достижения заключается в том, что лекарственная чувствительность ГСК оценивается как показатель апоптоза CD34+ в популяции мононуклеаров после контакта клеток с лекарственными средствами в установленных предварительно концентрациях.

Для исследования использовали образцы клеток, выделенных из периферической крови и предназначенных для аутологичной трансплантации пациентам с множественной миеломой, а также образцы клеток донорского костного мозга, предназначенного для аллогенной трансплантации.

При необходимости предварительно выделяли мононуклеары путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина 1,077 г/мл (Sigma) по стандартной методике. После лизиса остаточных эри-троцитов клетки культивировали в течение 24 ч без лекарственных средств и с различными лекарственными средствами в среде RPMI 1640 с добавлением 10% ЭТС. Фенотип и состояние клеток оценивали по связыванию антител к CD34-FITC, аннексинаV-PE и внутриклеточному проникновению 7-AAD.

После культивирования клетки отмывали от среды и оценивали содержание жизнеспособных ГСК (CD34+, не связавшие AnV- и 7-AAD-). Клетки, связавшие ан-нексин V, рассматривали как клетки на ранних стадиях апоптоза, тогда как клетки, связавшие 7-AAD, относили к клеткам на поздней стадии гибели. Записывали не менее 100 000 событий. Анализ данных осуществляли с использованием программы CellQuestPro. Наблюда-ли значительную индивидуальную вариацию чувствительности ГСК в образцах клеток ко всем изученным химиопрепаратам.

При анализе общего содержания и жизнеспособности CD34+-клеток выявлено изменение их общего содержания под действием химиопрепаратов. Причем наблюдали как уменьшение, так и увеличение относительного содержания CD34+-клеток в общей популяции мононуклеаров.

Это объясняется тем, что на поздних стадиях клеточной гибели происходит значительное изменение параметров светорассеивания и утрата поверхностных антигенов. Уменьшение содержания CD34+-клеток, по-видимому, связано с утратой поверхностных антигенов на поздних стадиях клеточной гибели.

Увеличение содержания CD34+-клеток может быть следствием того, что остальные мононуклеарные клетки оказываются более чувствительными к исследуемому лекарственному средству, чем ГСК. Так как общее содержание CD34+-клеток изменяется, доля клеток на стадии раннего и позднего апоптоза среди них не может отражать чувствительность клеток к химиопрепарату. Наиболее информативным показателем представляется доля жизнеспособных (AnV-\7-AAD-) CD34+-клеток в образце.

Определенный интерес представляет содержание CD34+-клеток в общей популяции мононуклеаров как самостоятельный показатель. Если общее содержание стволовых клеток достаточно значительно коррелирует с содержанием жизнеспособных стволовых клеток, это может значительно удешевить процедуру анализа.

Для сравнения между собой данные нормирова-ны по контролю. Коэффициенты корреляции между общим содержанием CD34+ клеток и содержанием жизнеспособных CD34+-клеток составили 0,73 для дексаметазона; 0,96 для винкристина и 0,64 для мелфалана. Это свидетельствует о том, что общее содержание CD34+-клеток среди мононуклеаров через 24 ч культиви-рования с химиопрепаратами может быть показателем чувствительности ГСК к дексаметазону и винкристину.


Область применения: онкогематология, трансфу-зиология, фармакология.
Рекомендации по использованию: в фундаментальных исследованиях по лекарственной чувствительности ГСК, в прикладных исследования при сопоставлении лекарственной чувствительности ГСК и лейкозных клеток.
Предложения по сотрудничеству: проведение совместных экспериментальных и клинических исследований по оценке ответа опухолевых и нормальных клеток на лекарственные средства, консультативная помощь при внедрении.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта