УДК: 616.15:615.38:61:57.086
Год издания: 2012

Условия эффективного наращивания in vitro мобилизированных кроветворных клеток периферической крови пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями

Петевка Н.В.Васина Е.В.Костюнина В.С.Гончарова Н.В.Змачинский В.А.Оводок А.Е.Смольникова В.А.Свирид И.В.Хулуп Г.Я.Усс Е.В.Потапнев М.П.
Рубрики: 76.03.3376.29.33
Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий
Тема НИР: «Разработать и внедрить технологию наращивания ex vivo предшественников гемопоэза для с аутотрансплантации пациентам с онкогематологическими заболеваниями»
Сроки выполнения НИР: июль 2011 г. — декабрь 2014 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Г.Я. Хулуп, д-р мед. наук, проф. А.Л. Усс.
Соисполнители: УЗ «9-я ГКБ»
Источник финансирования: госбюджет.

В настоящее время одним из способов лечения химиорезистентных лимфопролиферативных заболеваний является трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) после проведения миелоаблативного режима химиотерапии. Однако у 20–46% пациентов трансплантация невозможна вследствие низкого количества клеток-предшественников в трансплантате, что коррелирует с отсроченным приживлением, увеличением времени восстановления тромбоцитов и нейтрофилов, развитием инфекционных осложнений. Один из путей решения данной проблемы — получение дополнительного количества кроветворных клеток путем наращивания in vitro. Экспансия в условиях современ-ного культивирования с аутологичными мезенхимными стромальными клетками костного мозга (МСК КМ) позволяет сократить расход факторов и время культивирования in vitro.

Цель: изучить эффективность экспансии предшественников гемопоэза пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями после химиотерапии на подложке из аутологичных МСК КМ.

Экспансия на подложке из аутологичных МСК КМ приводит к пятикратному увеличению количества ранних предшественников гемопоэза.

В ходе исследования отработана методика выделения CD34+-клеток путем иммуномагнитной сепарации лейкоконцентрата мобилизированной периферической крови пациента. Определен оптимальный цитокиновый состав, необходимый для успешной экспансии сепарированных клеток, включающий фактор роста стволовых клеток (SCF, 100 нг/мл), лиганд Fl-тирозинкиназы-3 (Flt-3 Ligand, 100нг/мл) и тромбопоэтин (TPO,25 нг/мл). Определен 5–6-дневный срок культивирования CD34+-обогащенной фракции лейко-концентрата, в течение которого наблюдается активная пролиферация клеток с сохранением пула незрелых гемопоэтических предшественников.

По итогам сокультивирования с МСК КМ в CD34+-клетках наблюдалось увеличение общего количества ядросодержащих клеток (ЯСК) и клеток, несущих CD34 маркер в 9,4±2,5 и 5,2±2,4 раз соответственно. Ранние гемопоэтические предшественники, способные к репопуляции в КМ, после трансплантации имеют фенотип CD34+CD38-. На 6-й день экспансии популяция данных клеток составила 37,2% от всех СD34+-клеток. Все клетки сохраняли CD45+ фенотип до и после экспансии.

Культивирование ГСК in vitro в присутствии одного из компонентов костномозговой ниши (МСК) позволяет за короткий период получить значительное увеличение ранних гемопоэтических предшественни-ков. Предполагается, что присутствие данных клеток позволит улучшить приживляемость трансплантата и обеспечить скорейшую регенерацию кроветворения у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями. Небольшой срок культивирования позволяет снизить риск инфекционной контаминации и трансформации культуры.

Таким образом, экспансия кроветворный клеток в условиях сокультивирования с МСК КМ может быть использована для ускорения восстановления нормального кроветворения у пациентов с низким содержанием гемопоэтических клеток в мобилизированной периферический крови.


Область применения: клеточная биология, трансплантология, регенеративная медицина, онкогематология.
Рекомендации по использованию: рекомендуется использовать в учреждениях здравоохранения онкологического и гематологического профиля при недостаточной клеточности исходного трансплантата.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по разработке протоколов культивирования, наращивания СК и использования их для трансплантации.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта