Цель:провести сбор генеалогического анамнеза в семьях пробандов с Х-сцепленными ПИД (Х-сцепленная агаммаглобулинемия — X-linked agammaglobulinemia XLA, Х-сцепленная хроническая гранулематозная болезнь — ХГБ, синдром Вискотт–Олдрич) для определения распространенности мутантного гена среди поколений внутри одной семьи, а также описать результаты пренатальной диагностики данной группы пациентов в Беларуси.

Первичные иммунодефициты (ПИД) — группа заболеваний, в основе которых лежат врожденные, генетически детерминированные нарушения функций иммунной системы. Главным проявлением ПИД является повышенная чувствительность к инфекциям. На сего-няшний день описано 257 первичных иммунодефицитов, за которые отвечает 237. Большинство первичных иммунодефицитов имеют аутосомно-рецессивный тип наследования (80,5%), 12% — аутосомно-доминантный и 5% — Х-сцепленный.

Из 13 генов, локализованных на Х-хромосоме и отвечающих за первичные иммунодефициты, 2 описаны у единичных пациентов (MAGT1,TAZ), 4 гена (XIAP, DKC1, IKBKG, PFC) встречаются менее чем у 1 на 1 000 000 новорожденных мальчиков, остальные 7 (BTK — Х-сцепленная агаммаглобулинемия, CYBB — Х-сцепленная хроническая гранулематозная болезнь, WAS — синдром Вискотт-Олдрич, Х-сцепленный тяжелый комбинированный иммунодефицит, FoxP3 — иммунодисрегуляция, полиэндо-кринопатия, энтеропатия, сцепленная с Х-хромосомой, SH2D1A — Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром, CD40L— Х-сцепленный гипер-IgM-синдром) встречаются довольно часто в национальных регистрах пациентов с ПИД.

В национальном регистре Беларуси пациенты с Х-сцепленными ПИД составляют около 30% от всех зарегистрированный детей в возрасте до 18 лет. Матери-носители не имеют клинических проявлений первичного иммунодефицита, но передают мутантный ген своим сыновьям с 50% вероятностью. Многие Х-сцепленные первичные иммунодефициты являются очень тяжелыми клинически, такие как хроническая гранулематозная болезнь, Х-сцепленный тяжелый комбинированный иммунодефицит, иммунная полиэндо-кринопатия, энтеропатия, сцепленная с Х-хромосомой, синдром Вискотт-Олдрич. Для предотвращения рождения больных мальчиков необходимо проведение пренатальной диагностики.

Для достижения цели использовались следующие методы:

1. Клинико-генеалогический метод — сбор информации проводился путем опроса, анкетирования, личного собеседования. Опрос начинался с родственников по материнской линии для составления генеалогического древа пробандов с Х-сцепленными иммунодефицитами и результаты опроса отражались в виде генеалогических древ семей.

2. Мутационный скрининг экзонов генов BTK, CYBB, WAS, IL2RG (SSCP, прямое секвенироние).Секвенирование экзона мутантного гена у родных, двоюродных сестер, матерей, бабушек пробандов с Х-сцепленными первичными иммунодефицитами.

Забор материала плода для проведения пренатальной диагностики проводился на базе ГУ «РНПЦ “Мать и дитя”». Диагностику проводили следующими методами: определение пола с помощью УЗИ; биопсия ворсин хориона; амниоцентез; определение пола плода цитогенетическими методами; прямое секвенирование ДНК, выделенной из ворсин хориона и амниотической жидкости, на поиск мутации в гене Х-ПИД.

Результаты генеалогического анамнеза семей пробанда Х-сцепленной агаммаглобулинемии

В семьях пациентов с Х-сцепленной агаммаглобу-линемией (6 семей) данных о ранних детских смертях по материнской линии вследствие инфекционных осложнений получено не было. В двух семьях все рожденные мальчики были больны (диагностированные пробанды), еще в одной семье один мальчик был болен, один здоров. В остальных семьях пробанд был единственный ребенок. Данные семейного наследования гена BTK отражены на рис. 1.

Мутаций de novo на уровне пробанда обнаружено не было. В 3-х семьях проверялось наличие носительства мутации в гене BTKу бабушек пробанда. У всех носительство подтверждено.

Результаты генеалогического анамнеза семей пробанда Х-сцепленной хронической гранулематозной болезнью

В семьях с Х-сцепленной хронической гранулематозной болезнью позитивный семейный анамнез по материнской линии наблюдался в 2 семьях из 8-ми. Графическое представление родословной отображено на рис. 2 и 3.

В четырех семьях пациентов с Х-сцепленной хронической гранулематозной болезнью отягощенного семейного анамнеза не наблюдалось, однако матери всех пациентов были носителями патологического гена на Х-хромосоме, что было подтверждено методом проточной цитометрии.

Позитивный семейный анамнез в группе семей с ХГБ наблюдался в 3-х семьях из 8-ми (2 и более поколений). Повторное рождение мальчиков наблюдалось в одной семье (старший брат умер от туберкулеза), в 7 семьях первые роды — пробанд, 1 семья — первая девочка, 2-й ребенок — пробанд.

Мутаций de novo на уровне пробандов обнаружено не было, мутации de novo были обнаружены у 2-х ма-терей из 6-ти.

Результаты генеалогического анамнеза семей пробанда с синдромом Вискотт–Олдрич

В семьях пациентов с синдромом Вискотт–Олдрич позитивный семейный анамнез наблюдался в двух семьях. Графическое отображение генеалогических древ представлено на рис. 4 и 5. В первой семье — это гибель родных братьев матери от осложнений после тромбоцитопении в 3, 5 и 7 лет.

В остальных четырех семьях пациентов с синдромом Вискотт–Олдрич национального регистра Республики Беларусь данных о наследовании мутаций из поколения в поколение получено не было.

Мутаций de novo на уровне пробандов обнаружено не было, de novo мутации были обнаружены у 1-й ма-тери из 5-ти.

Результаты пренатальной диагностики в семьях с Х-сцепленными ПИД в Беларуси

В двух семьях с Х-сцепленными первичными иммунодефицитами было подтверждено носительство мутантных генов CYBB и IL2-RG у матерей методом проточной цитометрии и прямого секвенирования.

Пренатальная диагностика в виде биопсии ворсин хориона в семье с Х-сцепленной хронической гранулематозной болезнью (Х-ХГБ) была проведена дважды. В первом случае на 12-й неделе беременности была выполнена биопсия ворсин хориона, плод — мальчик, носительство мутации CYBBgene, Ex 6, 696-697del TT, сдвиг рамки считывания, была подтверждена на 4-й день после забора материала. Беременность была прервана по результатам генетического анализа. Во втором случае плод — двойня, мальчики с осложненной акушерской патологией — монохориальная, моноамниотическая беременность. Беременность была прервана по акушерской патологии, мутационный анализ материала плодов не проводился. Данные генеалогического анализа и пренатальной диагностики отражены на рис. 6.

Как видно, у матери пробанда с Х-ХГБ мутация в гене CYBB была de novо, т. к. ни у бабушки, ни у тети пробанда носительство мутации подтверждено не было.

В семье с Х-сцепленным тяжелым комбинированным иммунодефицитам (Х-ТКИН) семейный анамнез был отягощен. В одной семье наблюдались две повторных смерти мальчиков в возрасте 7 мес. и 28 дней от полиорганной недостаточности вследствие комбинированного иммунодефицита, а также одна неразвивающаяся беременность.

Пренатальная диагностика проводилась в виде амниоцентеза. На 17-й неделе беременности был проведен забор амниотической жидкости в объеме 10 мл. По данным УЗИ определен плод мужского пола. Мутационный анализ ДНК из осадка клеток амниотической жидкости выявил отсутствие мутации g-IL2 gene, 5 ex g.7272 C>T, 235Glu>stop.

Таким образом, клинико-генеалогическим методом было обнаружено семейное наследование в 3-х из 5-ти семей с Х-сцепленной хронической гранулематозной болезнью, в 3-х из 7-ми семьях — с синдромом Вискотт-Олдрич. В семьях пациентов с Х-сцепленной агаммаглобулинемией семейного наследования обнаружено не было.

Все матери пациентов с Х-сцепленными первичными иммунодефицитами являлись носителями мутантных генов, локализованных на Х-хромосоме.

Мутаций de novo на уровне пробандов обнаружено не было; de novo мутации были обнаружены у 1-й ма-тери из 5-ти в семьях с синдромом Вискотт–Олдрич, у 2-х из 6-ти — ХГБ.

Пренатальная диагностика в виде забора ворсин хориона на 12-й неделе беременности проводилась в одной семье с Х-ХГБ, плод — мальчик, было обнаружено носительство мутации в гене CYBB, беременность прервана. Пренатальная диагностика в виде амниоцентеза на 17-й неделе беременности в семье с Х-ТКИН у плода-мальчика носительство мутации в гене g-IL2 не было обнаружено.