Цель - с помощью разработанной ранее методики определения лекарственной чувствительности гемо­поэтических стволовых клеток (ГСК) сравнить инду­цибельность апоптоза в ГСК ex vivo при использовании лекарственных средств, применяемых в терапии опухо­левых заболеваний кроветворной ткани.

Сущность достижения заключается в обнаружении лекарственной устойчивости или чувствительности к тем или иным лекарственным средствам (ЛС) избира­тельно ГСК в общей популяции мононуклеаров.

Новизна исследования состоит в обосновании воз­можности выбора лекарственного средства с мини­мальным токсическим действием на аутологичные или аллогенные ГСК при необходимости химиотерапии.

Применение в лечении опухолевых заболеваний кроветворной ткани и солидных опухолей химиоте­рапии, в т. ч. высокодозной, а также постоянно нарас­тающее использование трансплантации ГСК как ауто­логичных, так и аллогенных, справедливо привлека­ет внимание наряду с проблемой лекарственной рези­стентности злокачественных клеток и способах ее пре­одоления к определению лекарственной чувствитель­ности ГСК и соответственно к сохранению их жизне­способности. Если принимать во внимание выживае­мость ГСК при контакте с лекарственными средствами in vitro, можно косвенно судить о потенциале поддер­жания кроветворения в условиях химиотерапии.

Из образцов донорского костного мозга или пери­ферической крови, предназначенных для аллогенной трансплантации пациентам при лейкозах и других со­стояниях, а также образцов из аналогичных источни­ков пациентов с множественной миеломой, которых го­товили к аутологичной трансплантации, выделяли мо­нонуклеарные клетки по стандартной методике. Клет­ки подвергали воздействию лекарственных средств в концентрации, близкой к терапевтической, в питатель­ной среде в течение не менее 24 ч. После культивирова­ния клетки отмывали от среды и оценивали на проточ­ном цитофлуориметре содержание CD34+ клеток (с по­мощью моноклональных антител), а также апоптоти­ческих и мертвых CD34+ клеток (с помощью наборов FE или FITC AnnexinV Apoptosis Detection Kit. Клетки, связавшие АннексинV (АnnV), но не связавшие 7-Ами­ноАктиномицинД (7-AAD), рассматривали как клетки на ранних стадиях апоптоза, тогда как клетки АnnV+/7-AAD+ относили к мертвым клеткам. Наблюдали вари­абельность чувствительности ГСК в образцах клеток к изученным лекарственным средствам (рис.1, 2).

Рис. 1. Количество апоптотических (AnV+AAD-) и мертвых (AnV+AAD+) CD34+ клеток после 24-часового воздействия лекарственных средств
Рис. 2. Количество апоптотических (AnV+AAD-) и мертвых (AnV+AAD+) CD34⁺ клеток после 24-часового воздействия лекарственных средств

Из приведенных на рис. 1 данных следует, что ГСК при миеломной болезни оказались наиболее чувствитель­ными к действию бортезомиба (BOR), который широко применяется в терапии множественной миеломы и реци­дивирующих и резистентных форм некоторых лимфом. В меньшей степени токсическое действие на ГСК прояв­ляется при культивировании клеток с доксорубицином (DOX) и арабинозидом (ARA). Дексаметазон (DXM) мало влияет на апоптотические процессы в ГСК, тогда как остальные изученные лекарственные средства: мел­фалан (MELP), винкристин (VINCR), кармустин (KAR) и циклофосфамид (CPN) обладают способностью замет­но индуцировать гибель CD34+ клеток.

,

При культивировании клеток донорского проис­хождения в течение 24 ч совместно с лекарственными средствами (рис. 2) отмечено, как и в предыдущей серии экспериментов, отсутствие токсического эффекта DXM на CD34+ клетки. Чувствительность ГСК к индуциро­ванной гибели обнаружена при действии ARA, вепезида (VP) и флударабела (FLU) и в меньшей степени - в присутствии VNCR. Следует указать на нарастание ци­тотоксического влияния лекарственных средств на ГСК при увеличении длительности этого воздействия.

Прогнозирование ответа ГСК на лекарственные средства в сочетании с учетом лекарственной чувстви­тельности лейкозных клеток может способствовать бо­лее обоснованному применению терапии.