УДК: 616.15-018-091.818
Год издания: 2013

Спонтанный и лекарственно-индуцированный апоптоз гемопоэтических стволовых клеток

Свирновский А.И.Алейникова О.В.Усс А.Л.Шман Т.В.Гончарова Н.В.Пасюков В.В.Федуро Н.А.Сергиевич О.В.Дзюба Е.В.Тарас И.Б.Бакун А.В.Дрейчук Н.А.
Рубрики: 76.29.33
Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий
Тема НИР: «Разработать и внедрить метод подбора адекватной терапии рецидивов опухолевых заболеваний кроветворной ткани после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток с целью повышения ее эффективности».
Сроки выполнения НИР: 2011–2015 гг.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А.И. Свирновский, д-р мед. наук, проф., чл.-кор. НАН Беларуси О.В. Алейникова, д-р мед. наук, проф. А.Л. Усс.
Соисполнители: ГУ «Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии», УЗ "9-я городская клиническая больница" г. Минска.
Источник финансирования: госбюджет.

Цель - с помощью разработанной ранее методики определения лекарственной чувствительности гемо­поэтических стволовых клеток (ГСК) сравнить инду­цибельность апоптоза в ГСК ex vivo при использовании лекарственных средств, применяемых в терапии опухо­левых заболеваний кроветворной ткани.

Сущность достижения заключается в обнаружении лекарственной устойчивости или чувствительности к тем или иным лекарственным средствам (ЛС) избира­тельно ГСК в общей популяции мононуклеаров.

Новизна исследования состоит в обосновании воз­можности выбора лекарственного средства с мини­мальным токсическим действием на аутологичные или аллогенные ГСК при необходимости химиотерапии.

Применение в лечении опухолевых заболеваний кроветворной ткани и солидных опухолей химиоте­рапии, в т. ч. высокодозной, а также постоянно нарас­тающее использование трансплантации ГСК как ауто­логичных, так и аллогенных, справедливо привлека­ет внимание наряду с проблемой лекарственной рези­стентности злокачественных клеток и способах ее пре­одоления к определению лекарственной чувствитель­ности ГСК и соответственно к сохранению их жизне­способности. Если принимать во внимание выживае­мость ГСК при контакте с лекарственными средствами in vitro, можно косвенно судить о потенциале поддер­жания кроветворения в условиях химиотерапии.

Из образцов донорского костного мозга или пери­ферической крови, предназначенных для аллогенной трансплантации пациентам при лейкозах и других со­стояниях, а также образцов из аналогичных источни­ков пациентов с множественной миеломой, которых го­товили к аутологичной трансплантации, выделяли мо­нонуклеарные клетки по стандартной методике. Клет­ки подвергали воздействию лекарственных средств в концентрации, близкой к терапевтической, в питатель­ной среде в течение не менее 24 ч. После культивирова­ния клетки отмывали от среды и оценивали на проточ­ном цитофлуориметре содержание CD34+ клеток (с по­мощью моноклональных антител), а также апоптоти­ческих и мертвых CD34+ клеток (с помощью наборов FE или FITC AnnexinV Apoptosis Detection Kit. Клетки, связавшие АннексинV (АnnV), но не связавшие 7-Ами­ноАктиномицинД (7-AAD), рассматривали как клетки на ранних стадиях апоптоза, тогда как клетки АnnV+/7-AAD+ относили к мертвым клеткам. Наблюдали вари­абельность чувствительности ГСК в образцах клеток к изученным лекарственным средствам (рис.1, 2).


Рис. 1. Количество апоптотических (AnV+AAD-) и мертвых (AnV+AAD+) CD34+ клеток после 24-часового воздействия лекарственных средств

Рис. 2. Количество апоптотических (AnV+AAD-) и мертвых (AnV+AAD+) CD34+ клеток после 24-часового воздействия лекарственных средств

Из приведенных на рис. 1 данных следует, что ГСК при миеломной болезни оказались наиболее чувствитель­ными к действию бортезомиба (BOR), который широко применяется в терапии множественной миеломы и реци­дивирующих и резистентных форм некоторых лимфом. В меньшей степени токсическое действие на ГСК прояв­ляется при культивировании клеток с доксорубицином (DOX) и арабинозидом (ARA). Дексаметазон (DXM) мало влияет на апоптотические процессы в ГСК, тогда как остальные изученные лекарственные средства: мел­фалан (MELP), винкристин (VINCR), кармустин (KAR) и циклофосфамид (CPN) обладают способностью замет­но индуцировать гибель CD34+ клеток.

,

При культивировании клеток донорского проис­хождения в течение 24 ч совместно с лекарственными средствами (рис. 2) отмечено, как и в предыдущей серии экспериментов, отсутствие токсического эффекта DXM на CD34+ клетки. Чувствительность ГСК к индуциро­ванной гибели обнаружена при действии ARA, вепезида (VP) и флударабела (FLU) и в меньшей степени - в присутствии VNCR. Следует указать на нарастание ци­тотоксического влияния лекарственных средств на ГСК при увеличении длительности этого воздействия.

Прогнозирование ответа ГСК на лекарственные средства в сочетании с учетом лекарственной чувстви­тельности лейкозных клеток может способствовать бо­лее обоснованному применению терапии.


Область применения: онкогематология, трансплантология, фармакология.
Рекомендации по использованию: в фундаментальных исследованиях по лекарственной чувствительности ГСК, в прикладных исследования при сопоставлении лекарственной чувствительности ГСК и лейкозных клеток.
Предложения по сотрудничеству: совместные экспериментальные и клинические исследования по оценке ответа стволовых клеток на лекарственные средства, консультативная помощь при внедрении.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта