УДК: 616.831.9-002:578.7]-07:577.21
Год издания: 2013

Разработка диагностической тест-системы для выявления рнк-генома вируса лимфоцитарного хориоменингита методом ПЦР с детекцией продуктов реакции в режиме реального времени

Фомина Е.Г.Счесленок Е.П.Школина Т.В.Владыко А.С.
Рубрики: 76.03.4176.13.25
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать тест-систему для выявления вируса лимфоцитарного хориоменингита методом ПЦР в режиме реального времени».
Сроки выполнения НИР: январь 2011 г. — декабрь 2015 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А.С. Владыко.
Источник финансирования: госбюджет.

Вирус лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) относится к семейству Arenaviridae и является возбу­дителем одноименного инфекционного заболевания. Клинические проявления вирусного лимфоцитарно­го хориоменингита варьируют от сравнительно легких гриппоподобных случаев (85%) до менингитов, менин­гоэнцефалитов (12-15%), а иногда водянки головного мозга (у новорожденных). Описано тератогенное дей­ствие вируса, а также острые молниеносные формы с летальным исходом.

В настоящее время интерес к данному вирусу про­является с новой силой. Причиной этому служит появ­ление целого ряда научных публикаций о заражении вирусом ЛХМ при пересадке органов. Описаны в литературе врожденные случаи ЛХМ. Смертность при врож­денной патологии у таких детей составляет 35%, серьез­ные неврологические заболевания развиваются в 64% случаев. Несмотря на большую социальную значимость заболеваний, вызванных вирусом ЛХМ, гиподиагности­ка данной инфекции очевидна. Существенной проблемой является отсутствие высокочувствительных современных диагностических тест-систем для выявления генома ви­руса ЛХМ. В Республике Беларусь и в странах ближнего зарубежья такие тест-системы не производятся.

Цель -разработка тест-системы для выявления РНК-генома вируса ЛХМ в клиническом материале методом обратной транскрипции (ОТ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией продуктов реакции в режиме реального времени по технологии TaqMan (с использованием гибридизационно-флюоресцентной пробы). Основой диагностической тест-системы яв­ляются специфические олигонуклеотиды (праймеры) и гибридизационная проба, комплементарные нуклео­тидной последовательности генома вируса ЛХМ в 3,-нетранслируемой области S-сегмента. Праймеры фланкируют фрагмент генома размером 156 нуклеотид­ных оснований (позиции в геноме для прямого прайме­ра - 3222-3240, для обратного праймера - 3361-3377, для гибридизационной пробы - 3331-3351), согласно нуклеотидной последовательности штамма Armstrong. Анализ результатов проводят с помощью программно­го обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени». Ана­лизируют кривые накопления флуоресцентного сигна­ла по каналу ROX для регистрации накопления продук­тов амплификации фрагментов ДНК вируса ЛХМ и по каналу FAM для регистрации продукта амплификации ДНК ВКО. Наличие специфических фрагментов гене­тического материала вируса ЛХМ определяют с по­мощью контрольной положительной пробы (К+ПЦР), содержащей диагностически значимый фрагмент РНК вируса ЛХМ, амплифицированной в одном экспери­менте с РНК, выделенной из клинических образцов. Разработанная тест-система позволяет с высокой чув­ствительностью (5-10 копий на реакцию) и специфич­ностью (99,9%) выявлять геном вируса ЛХМ.


Область применения: лабораторная диагностика вирусных инфекций, анализ эпидемиологической ситуации по ЛХМ в потенциальных природных очагах, трансплантология, тестирование иммунобиологических лекарственных средств (вакцин), в производственном цикле которых использовался мозг лабораторных мышей.
Рекомендации по использованию: тест-система может быть использована для выявления РНК вируса лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) в клинических образцах пациентов (плазма крови, сыворотка, ликвор) и органах мышевидных грызунов.
Предложения по сотрудничеству: использование тест-системы в практике здравоохранения: республиканским и областными центрами гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья; Минским городским центром гигиены и эпидемиологии; инфекционными больницами; в трансплантологии, а также при разработке иммунобиологических лекарственных средств (вакцин).


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта