УДК: 616.72-002.77:[616.98:579.882]-07/.08
Год издания: 2013

Детекция возбудителей и выделение штамма Ch. trachomatis из воспалительного экссудата коленного сустава при ревматоидном артрите, ассоциированном с хламидийной инфекцией

Полещук Н.Н.Рубаник Л.В.Дейкун Д.А.Асташонок А.Н.Князева О.Р.Сорока Н.Ф.Талако Т.М.
Рубрики: 76.03.4176.03.4376.29.31
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать и внедрить в клиническую практику методы диагностики и лечения ревматоидного артрита, ассоциированного с хламидийной инфекцией».
Сроки выполнения НИР: 01.04.2011 — 31.12.2013.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Н.Ф. Сорока, д-р мед. наук, проф. Н.Н. Полещук
Соисполнители: УО «Белорусский государственный медицинский университет».
Источник финансирования: госбюджет

Ревматоидный артрит (РА) представляет собой хро­ническое полисистемное аутоиммунное заболевание с малоизученным этиопатогенезом, часто характери­зующееся проявлением эрозивно-деструктивного по­лиартрита. Этапность и многие механизмы патогенеза РА с формированием локальных очагов воспаления до настоящего времени остаются во многом не выяснен­ным. В литературе широко обсуждается роль ряда ин­фекционных агентов, претендующих на роль одного из этиологических факторов РА: Сhlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, Borrelia burgdorferi, мико­плазмы, вирус Эпштейн-Барра, ретровирусы (в т. ч. Т-лимфотропный вирус типа I человека), вирусы крас­нухи, вирусы герпесвирусы первого, второго, шестого и восьмого типов, парвовирус B19, цитомегаловирус, вирусы гепатита В и С и другие.

Цель - установить причины формирования очага воспаления в коленных суставах и определить наличие антител и антигенов в синовиальной жидкости паци­ентов при ревматоидном артрите, ассоциированном с хламидийной инфекцией.

Исследован гиперсекрет синовиальной жидкости (СЖ) коленного сустава 30 пациентов с ревматоидным артритом с помощью ПЦР, ИФА, МФА, культурально­го метода и электронной микроскопии.

Культуральный метод позволяет накопить возбуди­тель в количествах, детектируемых стандартными ди­агностическими подходами. В культуре клеток мож­но выделить как вирусы, так и бактерии (микоплазмы, боррелии, хламидии и т. д.). Проведенное нами иссле­дование показало, что в 19 из 30 (63,3%) проб в куль­туре клеток выделялась Ch. trachomatis: отмечалось ха­рактерное для возбудителя цитопатическое действие и специфическое свечение антигенов при обработке ме­чеными флуоресцеинизоционатом антителами. Следу­ет отметить низкую репродуктивную активность боль­шинства выделенных изолятов Ch. trachomatis (титр ≤104 ТЦД/50). Хламидии с такой репродуктивной ак­тивностью не удавалось длительно пассировать в суб­пассажах. Однако один штамм из суставной жидкости размножался с формированием специфических вклю­чений Гальбершедтера-Провачека в 40-60% клеток МсСоу. Филогенетический анализ показал, что он со­ответствует серовару В и имеет 100% гомологии с по­следовательностью ompA гена стандартного штамма Ch. trachomatis B-Har/36. Штамм Ch. trachomatis CT-1072/Минск/4/2012 депонирован в Специализирован­ную коллекцию вирусов и бактерий, патогенных для человека (№ депонента B-05/2012 от 10.10.2012).

На следующем этапе проведен молекулярно-генетический анализ, который позволяет, как известно, обнаружить специфические фрагменты ДНК практически всех патогенных для человека микроорганизмов. Резуль­таты ПЦР исследования показали: ДНК Ch. trachomatis в диагностическом титре 10-3-10-5 ГЭ/мл была обнаружена в 3 из 30 (10,0%) случаях, ДНК Borrelia burgdorferi в 18 из 30 (60,0%) образцах, ДНК Epstein-Barr virus обнару­жена в 8 из 30 (26,7%) случаях, ДНК Cytomegalovirus, Herpes simplex virus 1 и 2 types и Parvovirus B19 были обнаружены в разных образцах с равной частотой встречаемости в 1 из 30 (3,3%) случаях. Моноинфек­ция установлена в 20 случаях из 30 (66,6%). Сочетан­ная инфекция выявлена в 5 образцах СЖ из 30 (16,6%), в каждом из них обнаружены различные комбинации НК патогенов. В остальных 5 из 30 (16,7%) пробах НК исследуемых возбудителей не выявлялась. В остальных 5 из 30 (16,7%) пробах НК исследуемых возбуди­телей не выявлялась.

Для установления развития специфического ло­кального гуморального иммунного ответа на выявлен­ные микроорганизмы использовали иммунофермент­ный анализ (ИФА) и метод флуоресцирующих антител (МФА). Методом флуоресцирующих антител в 11 из 30 (36,7%) исследуемых СЖ были обнаружены антитела к спирохете B.burgdorferi в титрах 1:64-1:512. Антите­ла в титре 1:32, расцениваемые как сомнительные, об­наружены в 7 из 30 (23,3%) случаях. В 5 из 30 (16,7%) случаях регистрировалась одновременное наличие ан­тител как к Ch. trachomatis, так и к B. burgdorferi.

Методом ИФА в синовиальной жидкости 1 из 30 (3,3%) пациентов выявлены IgM к Ch. trachomatis, с аналогичной частотой (3,3%) уровень антител IgМ находился в серой зоне (сомнительный резуль­тат). IgA обнаружены в 2 из 30 случаях (6,6%) в ти­тре 1:5 (слабоположительный результат). IgG к MOMP Ch. trachomatis обнаружены в 6 из 30 (20,0%) образцов в титрах от 1:5 (слабоположительный) до 1:160 (силь­ноположительный). IgG к MOMP и плазмидному бел­ку pgp3 Ch. trachomatis выявлены в 6 из 28 (21,4%) об­разцах СЖ, сомнительный результат получен в 1 из 28 (3,6%) случаев. Частота выявления IgG к белку тепло­вого шока (cHSP60) хламидий в СЖ составила 2 из 27 (7,4%), в 1 из 27 (3,7%) был получен сомнительный ре­зультат. Иммуноглобулины класса M к Ch. pneumoniae не были выявлены ни в одном из исследуемых образ­цов. IgG обнаружены в 4 из 28 (14,3%) СЖ в титре 1:20, в 2 из 28 (7,1%) уровень антител находился в се­рой зоне.

Таким образом, у части пациентов выявлена про­дукция специфических антител локально в очаге вос­паления (выпоте коленного сустава) к различным воз­будителям (Сh. trachomatis и др.), что может являться патогенетически значимым маркером для назначения этиотропной терапии.

И, наконец, для детализации и возможного выявле­ния возбудителей в низких титрах, а также идентифи­кации патогенов, относящихся к другим семействам, применяли электронную микроскопию. Проведенное электронно-микроскопическое исследование культуры клеток McCoy, зараженных материалом (синовиальной жидкостью) пациентов, позволило выявить различные бактериальные и вирусные агенты: Mycoplasma spp., Borrelia spp., Micrococcaceae, представители семейства Herpesviridae, Ch. trachomatis.

Таким образом, в результате проведенной рабо­ты показано видовое многообразие микроорганиз­мов, которые, вероятно, напрямую участвуют в локаль­ном формировании иммунологически опосредованно­го деструктивно-воспалительного очага с преимуще­ственным повреждением синовиальной ткани. Полу­ченные данные, на наш взгляд, могут быть использова­ны при выборе тактики этиотропной терапии: противо­вирусной и антибактериальной. Низкая концентрация возбудителей в суставной жидкости и подлежащей тка­ни диктует необходимость применения не только раз­личных способов их накопления (жидкие питательные среды, перевиваемые культуры клеток), но и разработ­ки методических подходов к одновременной иденти­фикации возбудителей, относящихся к разным таксо­номическим группам. В этом аспекте перспективно ис­пользовать современные высокочувствительные спосо­бы детекции на основе нанотехнологических подходов в сочетании с электронной микроскопией.

Выявленная нами относительно высокая частота обнаружения антител к Ch. trachomatis указывает на доминирующую роль этого патогена в формировании воспаления. Все эти факты наводят на мысль, что при РА имеет место особая ассоциативная форма инфек­ции, при которой Ch. trachomatis, вероятнее всего, яв­ляется своеобразным триггером. Роль других патоге­нов требует дальнейшего изучения.


Область применения: ревматология, микробиология, лабораторная диагностика
Рекомендации по использованию: результаты работы внедрены на базе ревматологического отделения УЗ «9-я клиническая больница» г. Минска и могут быть использованы врачами-ревматологами других учреждений здравоохранения Беларуси
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь по лабораторной диагностике хламидийной и других инфекций, дальнейшие совместные исследования по указанной тематике. Разработка нового поколения тест-систем для обнаружения белковых маркеров вирусов и бактерий, находящихся в биологическом материале в наномолярных количествах


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта