УДК: 616.98:579.882]-07
Год издания: 2013

Способ детекции Chlamydia trachomatis на твердофазном аналитическом носителе с использованием флуоресцентных иммуномагнитных микросфер

Рубаник Л.В.Асташонок А.Н.Жавнерко Г.К.Квасюк А.А.Полещук Н.Н.
Рубрики: 76.29.50
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать технологию получения функционально-активных наночастиц и сконструировать тест-систему для выявления персистентных форм хламидийной инфекции».
Сроки выполнения НИР: январь 2011 г. — декабрь 2014 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. Н.Н. Полещук, канд. хим. наук Г.К. Жавнерко.
Соисполнители: ГНУ «Институт химии новых материалов» НАН Беларуси.
Источник финансирования: госбюджет.

Цель - разработать способ детекции Ch. trachomatis в биоматериале с использованием конъюгатов имму­номагнитных частиц, содержащих флуоресцентную СdSe/ZnS метку.

Для исследования использовали соскобный ма­териал пациентов с хламидийной инфекцией, а так­же образцы клинического материала пациентов, в ко­тором наличие Ch. trachomatis не было подтвержде­но ни культуральным методом, ни результатами ПЦР. В качестве положительного контроля был взят штамм Ch. trachomatis СТ-869 - депонент B-04/2012 от 10.10.2012. Специализированной коллекции вирусов и бактерий ГУ «РНПЦ эпидемиологии и микробиоло­гии». В качестве отрицательного контроля использова­ли интактную культуру клеток McCoy.

Для детекции возбудителя применяли синтезиро­ванные композиционные частицы размером ~2 мкм, которые представляли собой водорастворимые маг­нитные микросферы (ММС), покрытые полисилок­сановым слоем. Частицы обладали люминесцент­ными свойствами за счет введения в полимерный слой магнитного ядра полупроводниковых СdSe/ZnS нанокристаллов. Для придания композицион­ным частицам функциональных характеристик их оболочку активировали биотинилированными про­тивохламидийными антителами. Реакцию проводи­ли на поверхности «микрочипа». В качестве твер­дофазного носителя «микрочипа« применяли стан­дартные луночные стеклянные планшеты. Поверх­ность планшетов подвергали химической очистке и модифицировали путем иммобилизации в лунки ан­тител к Ch. trachomatis. Учет результатов осущест­вляли на флуоресцентном микроскопе типа «Nikon Е50i» (Япония).

Статистический анализ данных проводили с ис­пользованием программного обеспечения Statistica 6.0. За уровень статистической значимости принимался p<0,05.

В результате серий экспериментов отработаны раз­личные подходы пробоподготовки инфекционного биоматериала, обеспечивающие более полный выход во внеклеточное пространство элементарных, ретику­лярных и промежуточных частиц Ch. trachomatis. По­казано, что предварительная обработка культуральной жидкости, содержащей штамм Ch. trachomatis СТ-869, 2% раствором тритона Х-100 приводила к статистиче­ски достоверному увеличению количества хламидий­ных частиц (U = 159,0; rs = 0,64; р = 0,5) во внеклеточ­ной среде по сравнению со стандартным методом про­боподготовки (раздельное центрифугирование).

Продемонстрирована результативность использова­ния иммуномагнитных частиц в качестве "носителей" для концентрирования возбудителя. Отмечено успеш­ное селективное связывание композиционными ММС Сh. trachomatis (штамм СТ-869) из культуральной сре­ды не только при использовании цельного (неразведен­ного) хламидия-содержащего биоматериала, но и при разведениях пробы 1:2 и 1:4 (p<0,05) соответственно.

Дополнительно в параллельных пилотных исследо­ваниях показана эффективность использования синтезированных композиционных частиц и сконструиро­ванного твердофазного «микрочипа2 для детекции Сh. trachomatis в пробах соскобного материала, получен­ного от пациентов с урогенитальной патологией. Ком­позиционные частицы селективно связывались с воз­будителем на «микрочипе« только в тех биопробах, в которых его наличие было подтверждено культураль­ным методом или ПЦР. В то же время при исследова­нии контрольных образцов - интактной культуры кле­ток МсСоу - не отмечалось сорбции частиц на «ми­крочипе».

Таким образом, использование композиционных иммуномагнитных частиц с флуоресцентной мет­кой позволяет селективно извлекать и детектировать Ch. trachomatis в пробах биологического материала и перспективно для создания нанотехнологической диа­гностической тест-системы.


Область применения: микробиология, лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: конъюгаты иммуномагнитных частиц, содержащих флуоресцентную метку, могут быть использованы в качестве носителей для концентрирования и иммуномагнитной сепарации различных морфотипов частиц Ch. trachomatis, создания высокочувствительных и специфичных методов лабораторной диагностики хламидийной инфекции.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь при внедрении, совместные исследования по созданию меченных нанокомпозиционных частиц для обнаружения различных антигенов Ch. trachomatis.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта