Псориаз характеризуется нарушением пролифе­рации и дифференциации кератиноцитов, сосуди­стой гиперплазией и инфильтрацией мононуклеаров в места поражения. Предполагается, что микробные ассоциации (стрептококков, стафилококков, дрож­жей) и продукты их секреции могут являться триг­герами развивающейся иммуновоспалительной ре­акции при псориазе. Изучение процессов, происхо­дящих в культурах иммунокомпетентных клеток при воздействии различных факторов, является обще­принятым методическим подходом и важно для уста­новления механизмов и понимания роли данных фак­торов в процессах роста, дифференцировки и ответ­ной реакции клеток.

Цель - исследовать спектр и уровень экспрес­сии генов иммунной системы мононуклеарами периферической крови (МПК) под воздействием лизатов Candida albicans выделенных из бляшек пациентов с псориазом.

Для решения поставленной задачи использова­ли методы выделения РНК из культуры мононукла­ров периферической крови с последующей постанов­кой реакции обратной транскрипцией и мечением по­лученной кДНК. Далее кДНК гибридизировали на биочипе содержащем 652 гена с последующем ска­нированием и оценкой экспрессии генов. Статистиче­ский анализ и обработку проводили в пакете Microsoft Office 2010.

В результате исследована экспрессия 652 генов мононуклеарами крови под влиянием лизатов Candida albicans с помошью ДНК-биочипа. Число генов, досто­верно меняющих экспрессию (p<0,05) в 1,5 и более раз в сравнении с контролем, составило 121 (84 - выше контрольного значения и 37 генов - ниже контроль­ных значений). Наибольшие изменения обнаружены в генах, ответственных за клеточный цикл, пролифера­цию и апоптоз (n = 37), сигнальные пути и цитокины (n = 39). Также изменения обнаружены в генах, уча­ствующих в процессах В- и Т-клеточного иммунитета (29) и клеточной адгезии (16).

Рис. Экспрессия генов мононуклеарными лейкоцитами под действием лизатов дрожжей Candida albicans в сравнении с контролем

В группе генов цитокинов, хемокинов и их рецепто­ров (рисунок А) выявлена повышенная экспрессия мо­нонуклеарами ряда противовоспалительных цитоки­нов и их рецепторов: IL1,IL-6, IL-11, интерферона аль­фа рецептора, фактора некроза опухолей TNFa и неко­торых других, что связано, по нашему мнению, с акти­вацией CD4+ клеток под действием лизатов дрожжей. Усиливается экспрессия мононуклеарами инсулиново­го рецептора, эндотелиального фактора роста сосудов под действием лизатов дрожжей, снижается экспрессия IL-1, IL-13 рецептора, хемокинов CCR3 и CCR 7.

В группе генов клеточного цикла апоптоза и диф­ференцировки изменения (рисунок Б) экспрессии коснулись транскрипционных факторов NKFB2, DP-1, ак­тиватора транскрипции, фактора репликации С, ключе­вых белков клеточного цикла циклинов H, B1, G2. Сни­жена экспрессия фактора NFKB1, STAT5B. Как прави­ло, данные гены активируются под действием росто­вых факторов и цитокинов.

В группе генов, связанных с Т\В клеточным имму­нитетом (рисунок В), выявлена активация Toll-like ре­цепторов TLR2, TLR6 и TLR7 мононуклеарными лей­коцитами под действием лизатов дрожжей Candida albicans. Toll-like рецепторы ответственны за взаимо­действие клеток с антигенами микроорганизмов, а ак­тивация TLR2 рецептора сигнализирует о присутствии грибных липопротеинов и липотейхоевых кислот. Сни­жена экспрессия молекул главного комплекса гистосов­местимости HLA-B, HLA-DMA, HLA-DRA, участвую­щих в презентации антигена клетками.

Среди генов клеточной адгезии и метаболизма (ри­сунок Г) выявлена повышенная экспрессия васкуляр­ного эндотелиина и белка аннексина 1 мононуклеарами периферической крови под действием лизатов Candida albicans. Экспрессия металлопротеиназ 3 и 15 моно­нуклеарными лейкоцитами увеличивается в 3,4,±0,52 и 2,64±0,84 раз соответственно под действием лизатов дрожжей.

Выводы Метод биочипов, представленный в работе на примере изучения экспрессии генов МПК при вза­имодействии с лизатами Candida albicans, показал до­статочную эффективность и информативность. Среди молекул с отличающейся экспрессией мононуклеара­ми периферической крови стоит отметить TNFa, IL-6, annexin A, HSP70, IL-2, IL-4, IL-11, TLR2, TLR6 и TLR7, эндотелиальный фактор роста, белок эндотели­ин, Jak-STAT белки, активаторы транскрипции и кле­точного цикла NKFB2 и циклины циклины H,B1,G2. Данные гены являются маркерными и могут служить для оценки влияния микробных антигенов на популя­цию мононуклеаров периферической крови.