![]() |
УДК: 616.15-008.853.3-097:616.517]:575.117.2
Год издания: 2013
Экспрессия генов иммунной системы мононуклеарами периферической крови под воздействием лизатов Candida albicans
Левченя М.В., Титов Л.П.
Рубрики: 76.03.43
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать и внедрить тест-систему для выявления аутоантител к кератиноцитам у пациентов с дерматозами».
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф., чл.-кор. НАН Беларуси Л.П. Титов.
Источник финансирования: госбюджет.
Псориаз характеризуется нарушением пролиферации и дифференциации кератиноцитов, сосудистой гиперплазией и инфильтрацией мононуклеаров в места поражения. Предполагается, что микробные ассоциации (стрептококков, стафилококков, дрожжей) и продукты их секреции могут являться триггерами развивающейся иммуновоспалительной реакции при псориазе. Изучение процессов, происходящих в культурах иммунокомпетентных клеток при воздействии различных факторов, является общепринятым методическим подходом и важно для установления механизмов и понимания роли данных факторов в процессах роста, дифференцировки и ответной реакции клеток.
Цель - исследовать спектр и уровень экспрессии генов иммунной системы мононуклеарами периферической крови (МПК) под воздействием лизатов Candida albicans выделенных из бляшек пациентов с псориазом.
Для решения поставленной задачи использовали методы выделения РНК из культуры мононукларов периферической крови с последующей постановкой реакции обратной транскрипцией и мечением полученной кДНК. Далее кДНК гибридизировали на биочипе содержащем 652 гена с последующем сканированием и оценкой экспрессии генов. Статистический анализ и обработку проводили в пакете Microsoft Office 2010.
В результате исследована экспрессия 652 генов мононуклеарами крови под влиянием лизатов Candida albicans с помошью ДНК-биочипа. Число генов, достоверно меняющих экспрессию (p<0,05) в 1,5 и более раз в сравнении с контролем, составило 121 (84 - выше контрольного значения и 37 генов - ниже контрольных значений). Наибольшие изменения обнаружены в генах, ответственных за клеточный цикл, пролиферацию и апоптоз (n = 37), сигнальные пути и цитокины (n = 39). Также изменения обнаружены в генах, участвующих в процессах В- и Т-клеточного иммунитета (29) и клеточной адгезии (16).
В группе генов цитокинов, хемокинов и их рецепторов (рисунок А) выявлена повышенная экспрессия мононуклеарами ряда противовоспалительных цитокинов и их рецепторов: IL1,IL-6, IL-11, интерферона альфа рецептора, фактора некроза опухолей TNFa и некоторых других, что связано, по нашему мнению, с активацией CD4+ клеток под действием лизатов дрожжей. Усиливается экспрессия мононуклеарами инсулинового рецептора, эндотелиального фактора роста сосудов под действием лизатов дрожжей, снижается экспрессия IL-1, IL-13 рецептора, хемокинов CCR3 и CCR 7.
В группе генов клеточного цикла апоптоза и дифференцировки изменения (рисунок Б) экспрессии коснулись транскрипционных факторов NKFB2, DP-1, активатора транскрипции, фактора репликации С, ключевых белков клеточного цикла циклинов H, B1, G2. Снижена экспрессия фактора NFKB1, STAT5B. Как правило, данные гены активируются под действием ростовых факторов и цитокинов.
В группе генов, связанных с Т\В клеточным иммунитетом (рисунок В), выявлена активация Toll-like рецепторов TLR2, TLR6 и TLR7 мононуклеарными лейкоцитами под действием лизатов дрожжей Candida albicans. Toll-like рецепторы ответственны за взаимодействие клеток с антигенами микроорганизмов, а активация TLR2 рецептора сигнализирует о присутствии грибных липопротеинов и липотейхоевых кислот. Снижена экспрессия молекул главного комплекса гистосовместимости HLA-B, HLA-DMA, HLA-DRA, участвующих в презентации антигена клетками.
Среди генов клеточной адгезии и метаболизма (рисунок Г) выявлена повышенная экспрессия васкулярного эндотелиина и белка аннексина 1 мононуклеарами периферической крови под действием лизатов Candida albicans. Экспрессия металлопротеиназ 3 и 15 мононуклеарными лейкоцитами увеличивается в 3,4,±0,52 и 2,64±0,84 раз соответственно под действием лизатов дрожжей.
Выводы Метод биочипов, представленный в работе на примере изучения экспрессии генов МПК при взаимодействии с лизатами Candida albicans, показал достаточную эффективность и информативность. Среди молекул с отличающейся экспрессией мононуклеарами периферической крови стоит отметить TNFa, IL-6, annexin A, HSP70, IL-2, IL-4, IL-11, TLR2, TLR6 и TLR7, эндотелиальный фактор роста, белок эндотелиин, Jak-STAT белки, активаторы транскрипции и клеточного цикла NKFB2 и циклины циклины H,B1,G2. Данные гены являются маркерными и могут служить для оценки влияния микробных антигенов на популяцию мононуклеаров периферической крови.
Область применения: клиническая лабораторная диагностика.
Предложения по сотрудничеству: проведение совместных исследований с заинтересованными.