УДК: 615.9:504
Год издания: 2013
Оценка интегральной токсичности объектов окружающей среды методами биотестирования
Дудчик Н.В., Дроздова Е.В.
Рубрики: 76.01.94, 76.35.45
Республиканский научно-практический центр гигиены
Тема НИР: «Обосновать требования и разработать методы оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды».
Сроки выполнения НИР: январь 2010 г. — декабрь 2012 г.
Научный руководитель: канд. биол. наук Н.В. Дудчик, канд. мед. наук Е.В. Дроздова.
Источник финансирования: госбюджет.
Техногенное загрязнение окружающей среды в настоящее время приобрело глобальное значение. Существующая традиционная система контроля состояния и безопасности объектов окружающей среды для человека, основанная на химико-аналитических методах, может привести к заведомой недооценке опасности, не позволяя предусмотреть результат комбинированного действия двух и более токсичных веществ, присутствующих в малых количествах, а также токсичность их производных. В связи с этим для оценки токсичности целесообразно использовать показатель интегральной токсичности - токсичность объекта окружающей среды, обусловленная всей совокупностью присутствующих химических поллютантов. Для оценки интегральной токсичности используют методы биотестирования - процедуру установления токсичности среды с помощью тест-объектов по изменению их жизненно важных функций.
Разработанные специалистами ГУ «Республиканский научно-практический гигиены» методы оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды явилась итогом выполнения научно-исследовательской работы, в рамках которой получены следующие результаты.
Обоснованы научно-методические подходы для использования популяционных, субпопуляционных и морфологических параметров тест-моделей с целью отбора маркеров выявления интегральной токсичности на основе анализа предлагаемых в ЕС критериев оценки токсичности объектов, ретроспективного изучения микрофлоры как перспективных тест-моделей при биотестировании и определения критериев формирования батареи тестов для эффективной оценки интегральной токсичности и мутагенной активности объектов окружающей среды.
Проведены экспериментальные исследования чувствительности тест-культур к эталонным референс-веществам при тестировании интегральной токсичности и определен перечень референс-веществ для оценки релевантности методов биотестирования. В результате экспериментального изучения популяционных, кинетических, морфологических и биохимических параметров тест-культур отобраны информативные критерии оценки интегральной токсичности и суммарной мутагенной активности. Проведена оптимизация параметров проведения тестирования, в т. ч. рабочие параметры тест-культур, состав питательных сред, время и температурные режимы при проведении тестов. Получены новые данные о тинкториально-морфологических, культуральных, биохимических параметрах тест-объектов.
Разработаны батареи методов оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды в краткосрочных тестах.
Разработанные методы будут использованы для совершенствования действующей системы оценки и контроля безопасности среды обитания человека, основанной на традиционной санитарно-гигиенической практике, предоставляя объективную характеристику действительных химических рисков. Методы обеспечат достоверность, воспроизводимость результатов, точность, простоту исполнения, гуманизацию токсикологических экспериментов.
Разработанные методы обладают достаточными относительной точностью (в диапазоне 95-99%), относительной чувствительностью (95-98%) и относительной специфичностью (95-100%), что свидетельствует о возможности их использования при тестировании различных объектов окружающей среды.
Определены критерии формирования батареи тестов для эффективной оценки интегральной токсичности и мутагенной активности объектов окружающей среды. Расширение круга тест-систем и формирование их в батареи тестов значительно расширяет возможности биотестирования, в ряде случаев удешевляет проведение экспериментов и сокращает объемы исследований.
Обобщение полученных данных с учетом чувствительности методов к отдельным группам веществ и особенностей тестируемых сред (вода, вытяжка и т. д.) позволило определить последовательность этапного тестирования, основанную на метрологических параметрах методов (точность, чувствительность, воспризводимость, диапазон оценки токсичности), а также по степени эволюционной организации тест-модели. Краткосрочные тесты, включаемые в батарею, являются взаимодополняющими, т. е. отличаются по конечному эффекту (повреждение ДНК, генные мутации, хромосомные аберрации и др.), по уровню биологической организации объекта исследования (прокариоты, эукариоты, системы in vitro, in vivo). Отобранные в батарею тесты прошли верификацию на соединениях с известной токсической активностью.
Проведена апробация разработанных методик оценки интегральной токсичности и суммарной мутагенной активности для их адаптации к различным объектам исследования: поверхностным и сточным водам, воде питьевой водопроводной, почве, седиментам.
Подана заявка на изобретение № а20110732 от 30.05.2011 «Способ количественной оценки ингибирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas» (авторы Дудчик Н.В., Половинкин Л.В., Застенская И.А., Дроздова Е.В., Трешкова Т.С.), получен приоритет
Методы внедрены в ГУ »Республиканский научно-практический гигиены» в 2012 г
Область применения: оценка объектов окружающей среды, химических веществ и их смесей. Использование краткосрочных тестов для определения токсического действия позволило повысить эффективность токсикологических исследований за счет оптимизации материальных и временных затрат. Разработанные подходы использованы для совершенствования действующей системы оценки и контроля безопасности среды обитания человека, давая объективную характеристику действительных химических рисков, что обусловило их социальный эффект.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь ГУ «РНПЦ гигиены» при внедрении технологии оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды методами биотестирования. Перспективными представляются совместные исследования по обоснованию требований и разработке альтернативных методов оценки токсического воздействия в соответствии с требованиями надлежащей лабораторной практики, а также документов международных организаций, принятых в качестве гармонизирующих и стандартизирующих при проведении краткосрочных тестов.