УДК: 616.61:578.233.42]-074/.078
Год издания: 2014
Разработка алгоритма лабораторной диагностики BK вирусной инфекции
Дедюля К.Л., Амвросьева Т.В., Поклонская Н.В., Богуш З.Ф., Казинец О.Н., Землянский В.А.
Рубрики: 34.25.39, 76.03.41, 76.29.36
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Разработать алгоритм лабораторной диагностики BK вирусной инфекции у пациентов с нефропатией и создать диагностическую тест-систему для выявления ее возбудителя»; ГНТП «Новые технологии диагностики, лечения и профилактики» (подпрограмма «Инфекции и микробиологические нанотехнологии»).
Сроки выполнения НИР: I кв. 2014 г. — IV кв. 2015 г
Научный руководитель: проф., д-р мед. наук Т.В. Амвросьева.
Источник финансирования: госбюджет.
BK вирус по современной классификации входит в состав рода Polyomavirus, сем. Polyomaviridae. Он имеет выраженную тропность к эпителиальным клеткам почек и мочевыводящих путей и является одним из доминирующих вирусных патогенов, индуцирующих полиомавирус-ассоциированную нефропатию (ПВАН) у пациентов с иммунодефицитом различной этиологии (реципиентов органов и клеток, пациентов с ВИЧ, аутоиммунными или онкологическими заболеваниями). Клинически ПВАН достаточно сложно диагностировать, так как она мимикрирует отторжение трансплантата. Частота ее, как правило, в течение первого года после трансплантации составляет 1-10%. На поздних стадиях связанная с ПВАН потеря трансплантата может достигать 80%. Существенную роль в тактике ведения пациентов с BK вирусной инфекцией играет ее своевременная лабораторная диагностика и регулярный скрининг вирусной нагрузки. Следует отметить, что данные исследования на постоянной основе осуществляются в большинстве цивилизованных стран. Что касается Республики Беларусь, то до недавнего времени научные исследования по изучению данной инфекции не проводились. Сегодня отечественная практическая медицина испытывает определенные трудности в лабораторной диагностике BK вирусной инфекции, что связано с неразработанностью соответствующей методической базы. В рутинной практике диагностические исследования осуществляются эпизодически цитологическим методом - по обнаружению морфологически измененных «decoy» клеток в осадке мочи пациентов. Данный метод является морально устаревшим, имеет крайне низкую прогностическую ценность и в развитых странах практически не используется. Визуальная оценка морфологии клеток характеризуется низкой специфичностью и высокой субъективностью. Кроме того, результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том, что выявление «decoy» клеток в осадке мочи слабо коррелирует с вероятностью развития у них ПВАН и не позволяет проводить адекватную коррекцию терапии для ее предотвращения.
Целью настоящего исследования была разработка современного алгоритма лабораторной диагностики BK вирусной инфекции у пациентов с ПВАН.
Он включает 3 основных этапа, на каждом из которых используется свой комплекс диагностически значимых маркеров, а также применяются различные подходы к интерпретации полученных результатов. В его основе лежит метод ПЦР, направленный на детекцию ДНК возбудителя. На первом этапе (скрининга) данный метод используется для выявления лиц, у которых произошла реактивация BK вируса. Обнаружение BK вирусной ДНК в моче свидетельствует об активной вирусной репликации и позволяет предположить риск развития ПВАН. Следующие этапы лабораторной диагностики посвящены раннему выявлению ПВАН у таких пациентов. Для этого используется количественная модификация метода ПЦР. Вирурия, сопровождающаяся количеством ДНК BK вируса >107 и мРНК BK вируса >6,5х105, или виремия с показателем ДНК BK вируса >104 указывают на развитие ПВАН, что диктует необходимость гистологических исследований биоптата для подтверждения диагноза. При наличии патоморфологических изменений в тканях почки проводится коррекция терапии с целью снижения уровней иммуносупрессии. В данном случае рекомендуется назначение специфической антиBK вирусной терапии (лефлунамидом, цидофовиром и др.). При отсутствии патоморфологических изменений в тканях почки может быть проведена коррекция иммуносупрессивной терапии, так как выявление пороговых уровней вирусной нагрузки на 8 недель может опережать патологические сдвиги в тканях почки. Коррекция терапии проводится под контролем количественной ПЦР для мониторинга уровня BK вирусной нагрузки с целью определения ее эффективности.
Внедрение разработанного алгоритма лабораторной диагностики ВК вирусной инфекции в практику будет способствовать решению проблемы установления этиологии инфекционной патологии почек и мочевыводящих путей, что позволит выработать адекватную тактику этиотропного лечения пациентов, и тем самым, предотвратить развитие ее тяжелых клинических форм.
Область применения: лабораторная диагностика вирусных инфекций, трансплантология, онкология.
Рекомендации по использованию: разработанный алгоритм диагностики BK вирусной инфекции рекомендуется для использования в специализированных лабораториях научно-практических центров и лечебно-профилактических учреждений.
Предложения по сотрудничеству: консультативная и техническая помощь по лабораторной диагностике полиомавирусных инфекций, молекулярному типированию и дифференциации возбудителей, а также биоинформационному анализу полученных результатов.