В настоящее время среди наиболее распространен­ных генетических причин необструктивной азооспер­мии и олигозооспермии тяжелой степени рассматри­ваются аномалии кариотипа и микроделеции длинного плеча Y-хромосомы, захватывающие локус фактора азо­оспермии AZF (Azoospermia factor). Локус AZF включа­ет 3 субрегиона: AZFa, AZFb, AZFc. Для каждого из них клонированы участвующие в контроле сперматогенеза гены-кандидаты и определены значимые STS-маркеры. Изучение микроделеций локуса AZF существенно рас­ширяет лабораторные возможности диагностики муж­ского бесплодия и направлено на выявление генетиче­ских причин тяжелых нарушений сперматогенеза с це­лью дальнейшего выбора метода лечения.

Цель - внедрить детекцию микроделеций локуса AZF Y-хромосомы в комплексное генетическое обсле­дование при мужском бесплодии и изучить спектр ми­кроделеций локуса AZF Y-хромосомы у мужчин с тяже­лыми нарушениями сперматогенеза в Беларуси.

Пациентам с нарушениями сперматогенеза проводи­лось генетическое обследование, которое включало сле­дующие этапы: стандартное кариотипирование (поиск хромосомных аномалий в кариотипе), молекулярно-цитогенетический метод FISH (fluorescence in situ hybridization) в качестве дополнительной диагности­ки для уточнения структуры дериватных хромосом, молекулярно-генетическое исследование локуса AZF Y-хромосомы. По результатам кариотипирования из по­следующего исследования локуса AZF были исключе­ны пациенты с нарушениями сперматогенеза, обуслов­ленными полной формой синдрома Кляйнфельтера, транслокациями с участием X-хромосомы.

Всего на предмет наличия микроделеций локуса AZF обследованы 128 пациентов с тяжелыми наруше­ниями сперматогенеза: 6 - с аспермией, 78 - с азооспер­мией и 44 - с олигозооспермией тяжелой степени. Ис­следования проводились методом мультиплексной по­лимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием праймеров к STS-последовательностям Y-хромосомы: sY84, sY86, sY127, sY134, sY254, sY255, генам SRY и ZFY/X. При выявлении микроделеции проводилось подтверждение полученных результатов с помощью ду­плексной ПЦР. Результаты молекулярно-генетического анализа локуса AZF представлены в таблице. Гормо­нальные исследования пациентов с микроделециями су­брегиона AZFc выявили повышенный уровень фолли­кулостимулирующего гормона (ФСГ) у 10 пациентов из 13 (первичный гипогонадизм), нормальные показатели ФСГ у 1 пациента, результаты двоих были недоступны.

Примечание - *С целью уточнения структурных перестроек хромосом после стандартного кариотипирования проведе­но исследование методом FISH.

По результатам исследования пациентов Беларуси с бесплодием, обусловленным микроделециями локуса AZF, можно сделать следующие выводы:

- микроделеции субрегионов AZFa и AZFb (в на­шем исследовании в составе протяженных AZFbc-, AZFabc-микроделеций) обнаружены только у пациен­тов с предварительно установленной на предыдущих этапах структурно измененной хромосомой Y. При этом данные кариотипирования, FISH и ПЦР допол­няют друг друга, что указывает на необходимость ком­плексного подхода в исследовании природы изменен­ной Y-хромосомы;

- у пациентов с тяжелыми нарушениями сперма­тогенеза и нормальным кариотипом выявлены только микроделеции субрегиона AZFc (13/116,11,2%). Полу­ченные нами результаты частоты микроделеций AZF согласуются с аналогичными исследованиями, прово­димыми на других популяциях. Ключевыми фактора­ми при направлении пациентов с нормальным карио­типом на генетическое исследование локуса AZF могут являться тяжелые нарушения сперматогенеза и повы­шенный уровень ФСГ;

- частота и спектр микроделеций локуса AZF сре­ди мужчин с бесплодием в значительной степени за­висят от группы исследования; например, от включе­ния/исключения пациентов с синдромом Кляйнфельте­ра, транслокациями, дериватными Y-хромосомами, ин­версией пола.