Цель - разработать высокочувствительную методи­ку определения остаточных количеств антибиотиков пе­нициллиновой группы в сырье животного происхожде­ния и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС).

Для разработки высокочувствительной методики определения остаточных количеств антибиотиков пени­циллиновой группы (амоксициллина, ампициллина, пе­нициллина G, пенициллина V, оксациллина, клоксацил­лина, нафциллина, диклоксациллина) изучено влияние состава подвижной фазы на время удерживания пени­циллинов и величину их отклика. Определение пеницил­линов осуществлялось методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме регистрации положительных ионов. Установлено, что при использовании 0,1% раствора муравьиной кислоты и аце­тонитрила наблюдается удовлетворительное разделение 8 пенициллинов на обращеннофазной колонке Zorbax SB C₁₈. Использование деионизованной воды по сравнению с 0,1% раствором муравьиной кислоты приводит к уве­личению интенсивности откликов пенициллинов, но при этом их удерживание на хроматографической колонке зна­чительно снижается и пики аналитов сливаются. При ис­пользовании в качестве элюента 0,1% раствора муравьи­ной кислоты, содержащей 10 мМ раствор формиата ам­мония, время удерживания пенициллинов практически не меняется, однако интенсивность их откликов снижается приблизительно в 2 раза. Очевидно, природа катионов и анионов солей, присутствующих в подвижной фазе, вли­яет на ионизацию данных аналитов и приводит к образо­ванию аддуктов с иным соотношением массы к заряду, ко­торые не регистрируются масс-спектрометром. Поэтому в качестве элюента предпочтительнее использовать 0,1% раствор муравьиной кислоты и ацетонитрил.

При разработке условий подготовки пробы особое внимание было уделено очистке пробы от компонен­тов матрицы и концентрированию аналитов. Для этих целей широко используется твердофазная экстракция. Нами изучено удерживание пенициллинов на картрид­жах для твердофазной экстракции различной природы и полярности: Cromаbond HR-X 60 мг, Oasis HLB 60 мг, Oasis HLB 150 мг, Agilent OPT 60 мг, Cromаbond C₁₈ 500 мг. Результаты исследований представлены на рис. 1, который показывает, что пенициллины лучше удер­живаются на сорбентах, содержащих бензольное коль­цо в своем составе (Cromаbond HR-X, Oasis HLB). Хо­рошее удерживание аналитов объясняется образовани­ем лабильных адсорбционных комплексов с переносом заряда π-π типа за счет π-взаимодействия между аро­матической группой стационарной фазы и ароматиче­ским кольцом молекул пенициллинов. Установлено, что на картриджах Oasis HLB, содержащих 150 мг сорбен­та, наблюдается лучшее удерживание аналитов, чем на аналогичных картриджах, содержащих 60 мг сорбента.

Рис. 1. - Зависимость степени извлечения пенициллинов от используемого картриджа для твердофазной экстракции

На основании полученных данных разработана ме­тодика определения остаточных количеств антибиоти­ков пенициллиновой группы в сырье животного проис­хождения и пищевых продуктах методом ВЭЖХ-МС/МС. Диапазон определяемых концентраций каждо­го пенициллина 2-100 мкг/кг для молока и молочных продуктов и 10-800 мкг/кг для мяса, рыбы, субпродук­тов и продуктов на их основе. Проведены исследова­ния по метрологической оценке разработанной мето­дики.