Цель- оценить репаративный ответ клеток при хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ) ex vivo на лекарственные средства (ЛС) и определить содержание активных форм кислорода (АФК) в клетках для прогнозирования течения заболевания.

Сущность достижения заключается в выявлении роли устойчивости клеток при ХЛЛ к повреждению цитостатическими ЛС с последующим ответом пациентов на терапию, а также роли накопления АФК в клетках для оценки статуса пациентов.

Новизна исследования состоит в укорочении сроков принятия новых клинических решений и установлении связи между высоким содержанием АФК в клетках и неблагоприятным исходом заболевания.

ХЛЛ является самой распространенной и причем пока неизлечимой с помощью стандартной терапии формой лейкоза взрослых. При этом заболеваемость ХЛЛ возрастает, с одной стороны, за счет постарения населения (средний возраст пациентов при заболевании около 65 лет), а с другой - за счет выявления случаев и среди более молодых возрастных групп (около 10% заболевших в возрасте около 40 лет), что характерно не только для Беларуси, но и для стран Западной Европы и Северной Америки.

Предполагается, что новые подходы к исследованию проблемы ХЛЛ обеспечат разработку и внедрение технологии оценки клеточного репаративного ответа ex vivo, что позволит принимать персонифицированные клинические решения. При этом дополнительные методы исследования биологических свойств лейкозных клеток в конечном итоге могут привести к повышению клинической эффективности терапии ХЛЛ за счет снижения ее токсичности, а также стоимости лечения вследствие рационального использования дорогостоящих ЛС и создания системы оценки статуса пациентов при объективизации критериев выбора тактики ведения пациентов.

При этом имеется в виду, что оксидативный стресс играет особую роль в реализации цитотоксического эффекта в лейкозных клетках при ХЛЛ в связи с исходным повышенным содержанием АФК в этих лимфоцитах, хотя базальный уровень свободных радикалов в клетках характеризуется значительной гетерогенностью. Это неудивительно, так как двойственная роль АФК в физиологии и патологии клетки очевидна. Действительно, известно, что низкие и промежуточные уровни АФК способны даже защитить клетку от апоптоза путем активации антиоксидантных механизмов. Непреходящий интерес к метаболизму АФК при лейкозах связан еще и с тем, что манипуляции с АФК составляют суть одного из успешно развивающихся в последние годы подходов к терапии лейкозов, направленных на преодоление лекарственной резистентности, так как АФК могут выступать в качестве стрессовых факторов для ДНК.

Результаты определения ответа на лечение по общепринятым показателям в двух группах пациентов, которым проводили терапию без предварительного подбора или назначали ЛС, ингибирующие лейкозные клетки ex vivo, представлены в таблице 1. Они однозначно свидетельствуют о более высоком качестве ответа на терапию в случае ее индивидуального подбора.

Важно отметить, что выявленные различия между обеими группами сохранялись независимо от стадии заболевания и протокола терапии. Более того, возможно прогнозирование отдаленных результатов по выраженности ответа на начальном этапе терапии. При этом принятие решения о смене неэффективной терапии допустимо уже на третьем мес. Однако наличие тяжелых сопутствующих заболеваний у пациентов может сокращать возможности чувствительность-адаптированной терапии.

Одновременно установлено, что цитостатические ЛС способны индуцировать увеличение содержания АФК в клетках при их совместном культивировании (рисунок). Уровень накопления внутриклеточных свободнорадикальных соединений измеряли с использованием флуоресцентного зонда 2^′,7^′- дихлородигидрофлуоресцеиндиацетата (H₂DCF-DA, Sigma). Для окрашивания лимфоциты (1х10⁶ кл./мл) отмывали от цитостатических лекарственных средств в течение 5 мин при 300g и ресуспендировали в фосфатном буфере, содержащем H₂DCF-DA в конечной концентрации 1x10^-6 М. Инкубировали в течение различного времени в темноте при 37°С. Затем отмывали в фосфатном буфере (pH 7,4) в течение 5 мин при 300g и немедленно анализировали на проточном цитофлуориметре FACScan (BectonDickinson, США) в канале FL1-H. При этом оказалось, что исход заболевания может быть связан с содержанием АФК в клетках. В группе пациентов с летальным исходом этот показатель более чем в три раза превышал таковой в группе лиц в стадии неполной клинико-гематологической ремиссии или клинико-гематологической стабилизации.

Таблица 1 - Качество ответа на терапию пациентов с ХЛЛ в группе сравнения и основной группе

* Показатель статистически значимо отличается от аналогичного в группе сравнения.

Таблица 2- Динамика образования АФК в лимфоцитах периферической крови пациентов с ХЛЛ в связи с их статусом

Примечание: 1 - неполная клинико-гематологическая ремиссия
2 - клинико-гематологическая стабилизация
3 - летальный исход

Рисунок

Рисунок — Содержание АФК в лимфоцитах пациентов при B-ХЛЛ после воздействия лекарственных средств в терапевтических концентрациях
В качестве контроля принято содержание АФК в лимфоцитах пациентов при B-ХЛЛ до воздействия лекарственных средств;
* различия по сравнению с контролем достоверны (p<0,05);
† различия достоверны по сравнению с 1 ч (p<0,05);
# различия достоверны по сравнению с 15 ч (p<0,05)