Цель - проанализировать ответ гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и лейкозных клеток ex vivo на лекарственные средства (ЛС) у пациентов с трансплантацией ГСК (ТГСК) для выявления профилей клеточной лекарственной чувствительности в условиях цитостатической терапии опухолевых заболеваний кроветворной ткани.

Сущность достижения заключается в выявлении различий в лекарственной устойчивости клеток и персонифицированном подходе к лечению состояний, которые плохо поддаются стандартной терапии после ТГСК.

Новизна исследования состоит в установлении связи между лекарственной чувствительностью ГСК и ответом на терапию при опухолевых заболеваниях кроветворной ткани.

Целесообразность персонифицированной цитостатической терапии, особенно в случае рецидивов опухолевых заболеваний кроветворной ткани после ТГСК, становится все более очевидной в связи с повышением частоты внедрения в схему лечения ТГСК. Несмотря на то, что относительное количество рецидивов при этом варианте терапии не только не увеличивается, а скорее даже снижается, абсолютное число случаев рецидивов может расти. Одно из направлений повышения эффективности терапии рецидивов может быть связано с учетом данных о лекарственной чувствительности лейкозных клеток при рецидиве заболевания и ГСК, использованных для трансплантации. Применение цитостатических средств с высокой противолейкозной активностью и сниженной способностью повреждать кроветворение, поддерживаемое трансплантированными ГСК, предусматривает определение профилей лекарственной чувствительности лейкозных клеток в течение заболевания до трансплантации и в период рецидива, а также предназначенных для трансплантации ГСК.

Результаты определения ответа лейкозных клеток на различные ЛС при остром лейкозе у детей, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что величина концентрации лекарства (доза, вызывающая гибель 50% клеток LD50 мкг/мл), варьирует в диапазоне 6 порядков. При этом для арабинозида С и флударабела диапазон чувствительности является относительно узким (2 порядка), тогда как для дексаметазона, кладрибина и клофарабина он оказался более растянутым (4 порядка), что указывает на выраженную индивидуальную лекарственную чувствительность лейкозных клеток.

При определении лекарственной чувствительности предназначенных для аллотрансплантации донорских ГСК (CD34+ клетки) с помощью метода проточной цитометрии (таблица 2) установлено, что через сут культивирования клеток в присутствии ЛС апоптотические процессы регистрируются в 5-20% ГСК. Однако на 2 и 3-и сут культивирования различия в токсическом действии цитостатических средств, как правило, нарастают. ГСК менее резистентны к арабинозиду С, флударабелу и этопозиду, тогда как дексаметазон практически не токсичен для ГСК, а винкристин характеризуется относительно невысокой токсичностью по отношению к ГСК. При этом выявлены и определенные индивидуальные особенности лекарственной чувствительности к цитостатическим средствам донорских ГСК. Результаты исследований, в которых к настоящему времени возможно провести сопоставление профилей лекарственной чувствительности клеток и эффективности терапии острых лейкозов, свидетельствуют о том, что при высокой резистентности лейкозных клеток и/или высокой чувствительности ГСК ответ на терапию, как правило, менее благоприятный; нарастание лекарственной резистентности лейкозных клеток в процессе лечения является также неблагоприятным признаком; при этом резистентность к ЛС, которые не использовались в терапии, обычно не усиливается; корреляция между лекарственной чувствительностью лейкозных клеток и ответом пациента на терапию в процессе лечения варьирует в пределах от выраженной до ее отсутствия при наличии осложнений терапии (сепсис, миокардиодистрофия, острый респираторный дистресс-синдром и др. (вплоть до развития полиорганного синдрома), что необходимо принимать во внимание при учете результатов.

Параллельно обобщены сравнительные данные, полученные с помощью метода проточной цитометрии, о лекарственной резистентности СD34+ и CD34- клеток периферической крови или костного мозга у пациентов с множественной миеломой (ММ), к действию ряда ЛС, которые применяются в терапии этого заболевания наряду с аутологичной ТГСК. Результаты представлены в таблице 3 в виде индекса, рассчитанного как отношение процентного содержания CD34+ жизнеспособных клеток после контакта с ЛС к процентному содержанию CD34 - жизнеспособных клеток после контакта с ЛС. Следует отметить, что индекс даже при культивировании интактных клеток у 20% пациентов превышал 1 (сохранение более высокой жизнеспособности CD34+ клеток по сравнению с CD34-клетками), у 50% не отличался от 1 и у 11,5% оказался ниже 1 (меньшая жизнеспособность CD34+клеток). Статистически обработанные данные об ответе на терапию пациентов с ММ в связи с чувствительностью гемопоэтических стволовых клеток к ЛС свидетельствуют о том, что стабилизация заболевания или ремиссия после терапии в 4 раза чаще наблюдается у пациентов с сохранением лекарственной устойчивости ГСК, тогда как рецидив ММ чаще отмечался в тех случаях, когда ГСК заметно повреждались при контакте с лекарственными средствами. Эти данные указывают на целесообразность учета профиля лекарственной чувствительности ГСК при прогнозировании течения опухолевых заболеваний кроветворной ткани.

Таблица 1 - Вариабельность лекарственной чувствительности клеток при остром лейкозе (LD50 мкг/мл) по результатам МТТ-теста

Таблица 2 - Лекарственная резистентность донорских стволовых клеток

Таблица 3 - Процентное отношение содержания CD34+ жизнеспособных клеток к содержанию CD34- жизнеспособных клеток после контакта с лекарственными средствами