Разработана импортозамещающая высокоэффективная иммуноферментная тест-система для выявления антител класса М к вирусу Синдбис из семейства Togaviridae. Это связано с тем, что до настоящего времени арбовирусные инфекции остаются серьезной проблемой во всем мире, учитывая заболеваемость ими и смертность от них как в развитых, так и развивающихся странах, в т.ч. и на сопредельных с Республикой Беларусь территориях.

В Республике Беларусь выявлена циркуляция 13 арбовирусов из 5 семейств, из которых более половины способны вызывать заболевания у людей (Т.И. Самойлова, 2003, 2010, 2013). Среди выявленных циркулирующих вирусов следует отметить вирус Синдбис, циркуляция которого доказана на территории республики серологическими и вирусологическими исследованиями. Показано, что природные очаги вируса Синдбис выявлены в Брестской, Гомельской, Минской и Витебской областях, о чем свидетельствует обнаружение антител в сыворотках крови птиц, крупного рогатого скота (КРС) и людей и выделение вируса из комаров. Кроме того, при обследовании остролихорадящих лиц у 8 из них обнаруживались антитела в титрах от 1:10 до 1:20 (Брестская и Витебская области). У всех выявленных пациентов клиническая картина заболевания соответствовала лихорадке вируса Синдбис (Т.И. Самойлова, 2003, 2010, 2014). Переносчиками вируса являются кровососущие комары рр. Aedes и Culex, а резервуаром и источником возбудителя - птицы. В Северной Европе описано несколько заболеваний, вызываемых разными вариантами этого вируса и сопровождающихся лихорадкой, головной, суставной, мышечной болью, воспалением лимфатических узлов, сыпью - болезнь Погоста в Финляндии, Карельская лихорадка в России, болезнь Окельбо в Швеции. Сходные заболевания наблюдаются и в ряде стран Южной Америки, Африки, в Австралии, Индии, на Филиппинах, в Азербайджане, Средней Азии, Таджикистане. Отмечаются спорадические заболевания и небольшие вспышки, болеют преимущественно сельские жители. Заболеваемость повышается в летнее время, в период активности комаров.

Ежегодно в республике отмечается весенне-летний подъем заболеваемости сезонными недифференцированными лихорадками, среди которых могут быть заболевания арбовирусной этиологии. Поскольку возбудители сезонных недифференцированных лихорадок малоизучены, среди них могут быть и арбовирусные инфекции, которые проходят под другими диагнозами (ОРВИ, острые бронхиты, пневмонии неясной этиологии, серозные менингиты и др.). Сложившаяся эпидситуация по арбовирусным инфекциям требует эпидемиологического мониторинга на территории республики с разработкой тест-систем для диагностики выявляемых заболеваний. Для лабораторной диагностики арбовирусных инфекций до последнего времени в республике применялись серологические реакции: РТГА, РСК, которые обладают высокой специфичностью и чувствительностью, но уступают по скорости постановки диагноза такому экспресс-методу, как иммуноферментный анализ (ИФА). Ввиду отсутствия в Республике Беларусь тест-систем для экспресс-диагностики арбовирусных инфекций, в т.ч. вируса Синдбис, возникла необходимость их разработки и производства.

В рамках выполнения НИР разработана высокоэффективная иммуноферментная тест-система к вирусу Синдбис (штамм № 764, выделенный из кровососущих комаров в Беларуси).

Тест-система предназначена для выявления антител класса М непрямым методом твердофазного иммуноферментного анализа в сыворотках крови пациентов для диагностики заболеваний, вызываемых вирусом Синдбис. Основой тест-системы является антиген вируса Синдбис, который предназначен для иммобилизации на поверхности лунок планшетов с последующим использованием в иммунологических реакциях. Антиген вируса Синдбис (№764) получают на культуре клеток VERO E6 путем ее инфицирования и последующего 3-кратного замораживания и оттаивания. Препарат используют для сенсибилизации поверхности лунок полистирольных планшетов. Специфическую активность контролируют в ИФА, концентрацию белка - спектрофотометрически.

В качестве положительного контроля (К+) используется иммунная асцитическая жидкость (ИАЖ), содержащая антитела класса М к вирусу Синдбис. В качестве отрицательных контролей используются нормальная асцитическая жидкость (АЖ), не содержащая антител к вирусу Синдбис (1К-), и сыворотка человека, не содержащая антител к вирусу Синдбис (2К-). Специфическую активность контролируют в ИФА.

Конъюгаты антивидовые пероксидазные (антитела против иммуноглобулинов человека (IgM) и антитела против иммуноглобулинов мыши (IgM), меченные пероксидазой) - коммерческий препарат производства фирмы Sigma.

Основным свойством тест-системы является ее способность выявлять антитела в сыворотках крови пациентов за счет взаимодействия их с иммобилизованным на планшетах антигеном вируса Синдбис (№764). Выявление связавшихся с антигеном антител проводится с помощью антивидового конъюгата, меченного пероксидазой хрена. Учет реакции проводят спектрофотометрически.

Тест-система выпускается в комплекте с реагентами, необходимыми для постановки ИФА и соответствующими положительными и отрицательными контролями. Комплект обеспечивает 96 исследований, включая контроли.

Разработанная нами тест-система для экспресс-диагностики лихорадки Синдбис позволяет диагностировать заболевание в короткие сроки и ускорить постановку этиологического диагноза, учитывая многообразие симптомов проявления арбовирусных инфекций.