Цель- на основании модельного исследования обосновать целесообразность использования показателей флуоресценции для оценки состояния протеолитической активности сыворотки крови и синовиальной жидкости и установить дополнительные лабораторные признаки диагностики артритов (ревматоидного, реактивного и псориатического).

В исследовании приняло участие 79 пациентов с артритами в возрасте 30-50 лет: 33 - с ревматоидным артритом, серопозитивным, II степени активности и II рентгенологической стадией; 21 - с псориатическим асимметричным олигоартритом; 25 - с реактивным хламидиоиндуцированным артритом. Группу сравнения составили 46 доноров в возрасте 30-50 лет. Материалом для исследования были сыворотка крови и синовиальная жидкость пациентов. Проведено также 378 модельных экспериментов с использованием сывороточного альбумина человека (98%, Fluka) и трипсина (бычий, 9000 ед/мг, Fluka). Определение активности трипсиноподобных протеиназ (ТпА) в сыворотке крови и синовиальной жидкости проводили с использованием в качестве субстрата N-α-бензоил-D,L-аргинин паранитроанилида (БАПНА) по методу Erlander B. F. et al. [Erlanger, Kokowsky, 1961]. Определение содержания ингибиторов (α₁-антипротеиназного ингибитора и α₂-макроглобулина) проводили по методу Т. А. Хватова и В.Б. Беловой [В. Б. Хватов, Т. А. Белова, 1981]. Регистрацию протеолитической активности в сыворотке крови, синовиальной жидкости, в модельных экспериментах по расщеплению альбумина трипсином осуществляли: а) по содержанию ТХУ-растворимых продуктов протеолиза альбумина (А280) [Л. П. Алексеенко, 1968] на спектрофотометре СФ-46; б) по содержанию продуктов расщепления БАПНА (ТпА); в) по изменению интенсивности флуоресценции компонентов реакции гидролиза альбумина по истечении определенного времени инкубации, содержащих нерасщепленный субстрат, фермент-субстратные комплексы, продукты реакции I_кр и продукты реакции (I_пр., после остановки реакции добавлением ТХУ). В сыворотке крови и синовиальной жидкости также изучали интенсивность собственной флуоресценции (I_сб.). Спектры флуоресценции регистрировали на спектрофлуориметре СМ-2203 (SOLAR, Республика Беларусь) при длине волны возбуждения 286 нм.

В модельных экспериментах установлено, что протеолитическое расщепление сывороточного альбумина человека трипсином при увеличении концентрации субстрата, фермента и времени инкубации сопровождается снижением интенсивности флуоресценции компонентов реакции гидролиза альбумина (I_кр) (сильная, отрицательная значимая корреляционная взаимосвязь r= -0,76; r= -0,61; r= -0,70 соответственно, р<0,05) и увеличением интенсивности флуоресценции самих продуктов протеолитического распада (I_пр.) (сильная положительная значимая корреляционная взаимосвязь r=0,72; r=0,75; r=0,78 соответственно, р<0,05). Выявленные корреляционные взаимосвязи позволяют судить о том, что интенсивность флуоресценции является параметром, достоверно отражающим интенсивность протеолитического распада.

Установлена отрицательная корреляционная взаимосвязь между показателями протеолитической активности (А₂₈₀ и ТпА) и интенсивностью флуоресценции компонентов реакции гидролиза альбумина (I_кр.): в синовиальной жидкости - при ревматоидном (r= -0,41 и r= -0,9; р<0,05) и псориатическом артритах (r= -0,5; р<0,05); в сыворотке крови - в группе сравнения (r= -0,41; р<0,05), что аналогично взаимосвязям, полученным в модельных экспериментах. Выявлено, что активность протеиназ в сыворотке крови имеет прямую корреляционную взаимосвязь с аналогичными показателями в синовиальной жидкости: при ревматоидном артрите - по активности трипсиноподобных протеиназ (r=0,71; р<0,05) и интенсивности флуоресценции компонентов реакции гидролиза альбумина (r=0,55; р<0,05); при реактивном артрите - по активности трипсиноподобных протеиназ (r=0,8; р<0,05); при псориатическом артрите - по содержанию α₁-антипротеиназного ингибитора (r=0,91; р<0,05), что позволяет оценивать активность протеолиза при артритах, исследуя его показатели в сыворотке крови.

При ревматоидном, реактивном и псориатическом артритах наблюдается активация протеолитической системы сыворотки крови по сравнению с ее состоянием в группе сравнения: суммарная ингибиторная емкость уменьшается на 52, 52 и 64%, индекс протеолиза увеличивается в 5,7, 4,6 и 5,5 раза соответственно (р<0,01). Выявлено увеличение активности трипсиноподобных протеиназ в сыворотке крови пациентов с ревматоидным артритом в 2,7 раза, с реактивной и псориатической формой - в 2,5 и 1,9 раза соответственно (р<0,01). Значения ТпА в сыворотке крови более 30,65 ммоль/(л•с) свидетельствуют о наличии ревматоидного артрита: диагностическая чувствительность (ДЧ) - 83%, диагностическая специфичность (ДС) - 82%, диагностическая эффективность (ДЭ) - 82%. Установлено, что содержание α₁-антипротеиназного ингибитора в сыворотке крови пациентов с ревматоидным, реактивным и псориатическим артритами снижается на 34, 56 и 67% соответственно, по сравнению с группой сравнения (р<0,01). Уровень α₁-антипротеиназного ингибитора в диапазоне 1,3 г/л-1,9 г/л следует рассматривать в качестве лабораторного признака ревматоидного артрита (ДЧ - 85%, ДС - 89%, ДЭ - 88%). В синовиальной жидкости содержание α₁-антипротеиназного ингибитора при ревматоидном артрите уменьшается в 2,6 и 3 раза (р<0,017) по сравнению с реактивной и псориатической формой соответственно, а его значения менее 0,41 г/л рекомендуются в качестве дополнительного лабораторного маркера ревматоидного артрита (ДЧ - 88%, ДС - 78%, ДЭ - 81%). Установлено, что при псориатическом артрите индекс протеолиза в синовиальной жидкости в 4,6 и 4,3 раза ниже, чем при ревматоидном и реактивном артритах соответственно (р<0,017). Значения индекса протеолиза менее 1,8 рекомендуются в качестве лабораторного признака псориатического артрита (ДЧ - 86%, ДС - 88%, ДЭ - 87%).

Статистически определено, что увеличение интенсивности собственной флуоресценции (I_сб.) сыворотки крови пациентов в 1,6 раза (более 4,4 отн. ед.) по сравнению с группой сравнения (р<0,01) свидетельствует о наличии реактивного артрита (ДЧ - 82%, ДС - 87%, ДЭ - 86%). У пациентов с псориатическим артритом увеличивается интенсивность флуоресценции компонентов реакции гидролиза альбумина (I_кр) в сыворотке крови в 1,5, 1,8 и 1,9 раза (р<0,01) по сравнению с аналогичным показателем в группе сравнения и группах с ревматоидным и реактивным артритами. Значения (I_кр) в сыворотке крови в 1,5 раза превышающие таковые в группе сравнения (более 0,38 отн. ед.) характерны для псориатического артрита (ДЧ - 86%, ДС - 78%, ДЭ - 79%).