В настоящее время на рынке стран СНГ известно более 200 иммуномодулирующих и иммуностимулирующих лекарственных средств (ЛС), причем их спектр постоянно расширяется. Скрининговые исследования по оценке иммунобиологической активности веществ являются необходимой стадией их исследования на доклиническом этапе. В настоящее время для выявления иммунобиологической активности иммуностимуляторов в большинстве случаев используются лабораторные животные и первичные культуры клеток крови человека. Такие методы устарели, не позволяют добиться должной повторяемости и воспроизводимости.

Предложено для оценки потенциальных иммуномодуляционных свойств использовать перевиваемые линии Т- и В-лимфоцитов, а также культуры дендритных клеток (ДК) человека. Такой подход имеет существенные преимущества по сравнению с другими методами исследования: быстрое получение результатов, информативность, высокая чувствительность, объективность, качество, достоверность и точность измерения.

Цель исследования - создать банк линий клеток человека и комплексный метод их применения для тестирования лекарственных средств подгруппы иммуностимуляторов на этапах их разработки, производства и контроля качества.

С целью отбора наиболее подходящих для целей исследования линий клеток, охарактеризованы 10 Т-клеточных линий (C8166, CEM-SS, CEM.NKR, Molt-3, Molt-4, Molt-4 клон 8, Jurkat, Jurkat-tat, MT-2, MT-4) и 3 В-клеточные перевиваемые линии (Daudi, IM-9, CCRF-SB) по экспрессии поверхностных маркеров, транскрипционных факторов, регуляторных белков и продукции провоспалительных цитокинов методом проточной цитометрии. Для дальнейших исследований по заданию выбраны 3 линии клеток: Daudi, Jurkat-tat и MT-2. Создан криобанк, включающий все вышеперечисленные линии клеток.

Разработан комплексный метод оценки иммуномодулирующих свойств лекарственных средств, который включает:

1) оценку экспрессии молекул CD80, HLA-DR, CD32, CD205 и CD197, продукцию интерлейкина-12, показатели жизнеспособности и апоптоза дендритными клетками;

2) определение продукции реактивных форм кислорода и оценку фагоцитоза полинуклеарными фагоцитами;

3) анализ экспрессии молекулы CD69, а также продукцию фактора некроза опухолей-α линией клеток Jurkat-tat;

4) оценку экспрессии молекул CD80 и HLA-DR, показателей жизнеспособности и апоптоза линией клеток Daudi.

Проведена оценка иммуностимуляторных свойств лекарственных средств различного происхождения. Установлено, что ЛС на основе живых штаммов пробиотических бактерий, а также лизатов бактерий - возбудителей инфекций дыхательных путей обладают выраженным стимулирующим действием на АПК, нейтрофилы, В-клетки, и в меньшей степени Т-клетки. ЛС на основе инозина пранобекса оказали активирующее действие на ДК и В-клетки, что проявилось в усилении экспрессии молекул CD205, CD83, HLA-DR и продукции ИЛ-12. ЛС на основе умифеновира, азоксимера бромида, α-глутамил-триптофана и ЛС на основе экстракта тимуса КРС не оказали влияния на функциональную активность клеток иммунной системы.

Вид патентной защиты: заявка на изобретение.

Область применения: иммунология, иммунофармакология, контроль качества лекарственных средств.