В человеческой популяции вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) распространен повсеместно; первичное инфицирование обычно происходит в раннем детском возрасте, так что антитела присутствуют у 80% взрослого населения. Повышенный интерес к ВГЧ-6 обусловлен тем, что после первично перенесенной инфекции он сохраняется в организме практически всю жизнь. Однако форма инфекционного процесса может быть разной: либо латентно/персистентная, либо активная. Показано, что после первичной инфекции вирус из латентного состояния может быть реактивирован различными факторами.

Герпесвирусная инфекция, вызванная вирусом герпеса 6 типа, имеет многообразные клинические проявления, в основном с хроническим течением. Широкий спектр различных форм инфекций, вызываемой ВГЧ-6, диктует необходимость внедрения современных методов лабораторной диагностики. Диагностика базируется либо на определении антител, либо на детекции антигена вируса. Учитывая высокую распространенность вируса в человеческой популяции, серологические методы диагностики часто малоинформативны (особенно у детей), но востребованы для определения напряженности специфического гуморального иммунитета. Эти методы полезны для оценки перехода вируса из латентного в реактивированное состояние, и тогда наблюдается резкое нарастание титра специфических антител (более чем в 3-4 раза за 2 недели).

В настоящее время наиболее распространенным методом диагностики ВГЧ-6 инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР) для детекции ДНК вируса В настоящее время разработаны и используются различные варианты ПЦР, такие как ПЦР с электрофоретической детекцией, nested ПЦР, ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РТ) и др. Методы высокоспецифичны и чувствительны. Использование ПЦР в режиме реального времени позволяет диагностировать активную и латентно/персистентную формы инфекции. Присутствие ДНК ВГЧ-6 в сыворотке крови свидетельствует об активной форме, а детекция ДНК вируса в лейкоцитах - о латентно/персистентной форме. Применение ПЦР-РТ у пациентов с различной патологией обеспечивает быструю диагностику ВГЧ-6 инфекции и позволяет своевременно начать этиотропную терапию.

В Беларуси препараты для диагностики инфицированности ВГЧ-6 не производятся, но диагностика этой инфекции проводится. Для этого закупаются коммерческие тест-системы, которые широко производятся и используются во всем мире. Ближайшей страной-производителем является Россия.

Цель - разработка ПЦР тест-системы в режиме реального времени для лабораторной диагностики различных форм инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6.

Основной задачей для решения поставленной цели явилось определение целевого фрагмента генома ВГЧ-6 (консервативный фрагмент гена U25) для выявления ВГЧ-6. Разработана схема нуклеотидных последовательностей для синтеза праймеров на основании последовательности генома ВГЧ-6, штамм U1102 (X83413.1).

Сконструирован плазмидный вектор для определения аналитической чувствительности ПЦР в режиме реального времени. В плазмиду pXcm21 встроили ампликон ДНК ВГЧ-6 (консервативный фрагмент гена U25).

Проведены испытания разработанной тест-системы с использованием образцов клинического материала от пациентов с герпесвирусной инфекцией - 11 и нейроинфекцией - 5. Показано, что в 42% случаев выявлена инфекция ВГЧ-6 у герпесвирусных лиц, из них 50% с активной формой; и у 3 человек при нейроинфекции детектирована ДНК ВГЧ-6 в сыворотке крови, что свидетельствует об активной форме.

Таким образом, получена тест-система для определения ДНК вируса герпеса 6 типа, которая позволяет диагностировать различные формы инфекции, вызванной ВГЧ-6.