УДК: 577.222:[616.36+615.38]
Год издания: 2017
Выявление ДНК вирусов TTV и SENV
Воропаев Е.В., Осипкина О.В., Мицура В.М., Терешков Д.В., Зятьков А.А.
Рубрики: 76.03.41, 76.35.33
Гомельский государственный медицинский университет
Тема НИР: «Разработать диагностические алгоритмы и оценить роль прогностических факторов заболеваний инфекционного и иммунологического генеза».
Сроки выполнения НИР: январь 2016 г. — декабрь 2018 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук, доц. Е.В. Воропаев.
Источник финансирования: госбюджет.
К этиологическим агентам, способным вызывать поражение печени, кроме вирусов гепатитов A, B, C, D, E, относят и некоторые другие вирусы. TTV (transfusion-transmitted virus), открытый в 1997 г., имеет сферическую форму, размеры 30-50 нм; наружная оболочка отсутствует, геном TTV состоит из кольцевой одноцепочечной молекулы ДНК размером около 3,8 тыс. нуклеотидов. Последовательность генома TTV включает две большие открытые рамки считывания и несколько малых, а также нетранслируемый регион. Некоторые исследователи классифицируют более 40 генотипов вируса. Основным методом для изучения распространения TTV является полимеразная цепная реакция (ПЦР), однако из-за высокой изменчивости вирусного генома сложно найти универсальный набор праймеров для всех существующих TTV-генотипов. ДНК TTV выявляли в разных группах населения во многих регионах мира, по данным многочисленных исследований установлена его широкая распространенность. Показано, что TTV-инфекция статистически чаще регистрируется среди пациентов, имевших в анамнезе переливание крови, по сравнению с теми, кто не получал гемотрансфузий. Несмотря на широкое распространение TTV его патогенность остается предметом дискуссий. В связи с гепатотропностью вируса особый интерес представляет его роль в развитии заболеваний печени.
SENV, открытый в 1999 г., не имеет оболочки, содержит одноцепочечную кольцевую ДНК, около 3900 нуклеотидов, имеет 3 рамки считывания. Существует несколько генотипов вируса, обозначенных буквами A, B, C, D, E, F, G, H. ДНК различных генотипов SENV отличаются друг от друга на 15-40%, а от ДНК близких к ним TTV - на 40-60%. Наиболее пристальное внимание уделяется двум генотипам: SENV-D и SENV-H, так как установлено, что именно эти варианты чаще всего ассоциируются с посттрансфузионным гепатитом.
В настоящее время информация о распространенности TTV и SENV у населения Беларуси отсутствует. Методы их выявления нестандартизованы и продолжают совершенствоваться. В связи с этим актуальной является разработка методики обнаружения ДНК TTV и SENV, а также оценка частоты распространенности данных инфекций у пациентов с заболеваниями печени и доноров крови. Дальнейшие исследования позволят определить роль TTV и SENV в развитии патологии печени.
В исследовании были задействованы пациенты Гомельской областной инфекционной клинической больницы, Гомельской городской клинической больницы №3 и безвозмездные доноры Гомельской станции переливания крови. Экспериментальная выборка составила 282 пациента. В основную группу вошли 220 лиц с заболеваниями печени. Группу сравнения составили здоровые добровольцы: 50 доноров и 12 человек без признаков заболевания печени, имеющие отрицательные результаты обследования на маркеры вирусных гепатитов.
Для выявления ДНК SENV и TTV использовали метод ПЦР с последующей электрофоретической детекцией и верификацией секвенированием по Сэнгеру. В качестве материала для выделения ДНК использована плазма крови пациентов. Статистическая обработка полученной информации проводилась с помощью пакета Microsoft Excel 2010 и программы Statistica v 6.0. Статистически значимой считалась 95% вероятность различий (р<0,05).
Отработана методология по выявлению ДНК TTV, SENV-D и SENV-H, на основе которой получены предварительные результаты по распространенности TTV- и SENV-инфекции среди доноров и пациентов с различными формами парентеральных вирусных гепатитов В, С, гепатитов с неуточненной этиологией и циррозом печени различной этиологии. Значимых различий в частоте выявления ДНК TTV у пациентов с заболеваниями печени (24,6%, р=0,05) и в группе сравнения (37,1%) не отмечена. У лиц с острым гепатитом частота обнаружения ДНК SENV-D (10,8%) значимо ниже по сравнению с группой сравнения (р=0,005) и группой хронического гепатита (30,1%, р=0,028). При хроническом гепатите частота определения ДНК SENV-H у пациентов с хроническим гепатитом (51,5%) более чем в 2 раза (р=0,002) превышает показатель лиц с острым гепатитом (21,6%).
Область применения: инфекционные болезни, лабораторная диагностика.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования по указанной тематике.