В мире активно продолжаются исследования, направленные на выявление генетического полиморфизма, ассоциированного с развитием лекарственного поражения печени (ЛПП). Комплексное изучение особенностей метаболизма ксенобиотиков и эндогенных соединений гепатоцитами даст возможность не только узнать патофизиологические механизмы гепатотоксичности, но и лучше понять физиологические процессы, протекающие в печени. Наибольший интерес и значимость представляет открытие однонуклеотидного полиморфизма (SNP), ассоциированного с риском ЛПП.

Диагностика токсического (лекарственного) поражения печени вызывает множество трудностей, так как клиническая картина при этом заболевании может имитировать различные поражения печени другой этиологии. Чтобы точно установить диагноз, необходимы определенная настороженность, тщательный сбор анамнеза и наличие специфических маркеров ЛПП. Прием антиретровирусных лекарственных средств (АРЛС) при терапии ВИЧ-инфекции изначально подвергает пациента опасности возникновения ЛПП вследствие высокой гепатотоксичности подавляющего большинства ингибиторов обратной транскриптазы и АРЛС из других фармакологических групп. Процессы метилирования в печени являются ключевыми в реакциях обезвреживания ксенобиотиков; Ключевой фермент цикла метилирования - метилентетрагидрофолатредуктаза (MTHFR). В популяции наиболее распространены два вида полиморфизма гена - MTHFR (C677T) и MTHFR (A1298C). В результате этой замены функциональная активность фермента снижается, что может отразиться на процессах детоксикации в печени.

Цель - установить ассоциации полиморфных вариантов гена MTHFR с развитием гепатотоксичности вследствие приема АРП для терапии ВИЧ-инфекции.

Обследованы 92 пациента с диагнозом ВИЧ-инфекции, 60 (65%) из которых получали АРЛС в соответствии с утвержденными клиническими протоколами. Критерии включения: верификация диагноза «ВИЧ-инфекция» (ИФА, иммунный блоттинг, ПЦР), наличие иммунологического (CD4) и вирусологического (вирусная нагрузка) мониторинга эффективности АРЛС, добровольное с письменным информированным согласием участие пациентов, отсутствие перерывов в приеме АРЛС (при их назначении).

Генотипирование пациентов осуществлялось методом ПЦР с применением наборов реагентов НПФ «Синтол» (РФ). Выделение геномной ДНК пациентов проводилось из лейкоцитов цельной венозной крови набором реагентов «ДНК-экспресс-кровь» производства НПФ «Синтол» (РФ). С образцом выделенной ДНК параллельно проводили две реакции амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров. Образование продуктов амплификации оценивали по росту флуоресценции интеркалирующего красителя в режиме реального времени на амплификаторе Rotor Gene-Q («Qiagen», Германия).

Статистическая обработка данных осуществлялась при помощи пакета Statistica 10.0 (серийный номер AXAR207F394425FA-Q). Оценку соответствия частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга проводили с использованием критерия χ² (Пирсона), применяя on-line тест-программу http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml. Достоверность различий по частотам аллелей между изучаемыми выборками оценивали по критерию χ² (при p<0,05 результаты считали статистически значимыми).

Анализ исследуемых полиморфных вариантов изучаемых генов метилентетрагидрофолатредуктазы в изучаемой выборке показал соответствие наблюдаемого распределения генотипов для всех рассматриваемых вариантов гена ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (таблица 1). Такое равновесие указывало на то, что на генетическую структуру популяции по изучаемому полиморфизму не оказывали влияния различные воздействия (не действует отбор, не идет мутационный процесс, отсутствует обмен особями с другими популяциями, не происходит дрейф генов, все скрещивания случайны).

Таблица 1 — Распределение генотипов MTHFR (C677T) и MTHFR (A1298C) и соответствие их равновесию Харди–Вайнберга (HWE) в исследованных популяциях

На последующем этапе настоящего исследования изучена взаимосвязь ЛПП, верифицированного нами в соответствии с международными критериями гепатотоксичности (National Cancer Institute Cancer Therapy Evaluation Program: Common Toxicity Criteria. Veers. 2.0. 1999) с носительством определенного генотипа изучаемых видов полиморфизма MTHFR (таблица 2).

Для этого проанализирована активность ключевых диагностических органоспецифических печеночных ферментов (аланинаминотрансферазы - АлАТ, аспартатаминотрансферазы - АсАТ, γ-глутамилтранспептидазы - ГГТП, щелочной фосфатазы - ЩФ) и концентрации общего билирубина. Гепатотоксичность вследствие приема АРЛС диагностировалась при превышении верхней границы нормы хотя бы по одному из перечисленных лабораторных тестов в процессе антиретровирусной терапии.

Таблица 2 — Частота встречаемости возможных генотипов MTHFR (C677T) и MTHFR (A1298C) и отношение шансов (OR) развития гепатотоксичности у ВИЧ-инфицированных, принимающих АРЛС

Таким образом, проведенное исследование позволяет сделать следующие выводы:

1. Доминирующим генотипом гена MTHFR (C677T) в исследуемой когорте является гомозиготное носительство СС, а по гену MTHFR (A1298C) практически с одинаковой частотой встречаются гомозиготы AA и гетерозиготы АС.

2. В данном исследовании не обнаружено ассоциации изучаемых генотипов MTHFR (C677T) и MTHFR (A1298C) с риском развития токсического поражения печени.

Полученные результаты могут быть использованы для продолжения исследований на больших выборках с целью для установления носительства генотипов MTHFR в Республике Беларусь и их связи с риском токсических поражений печени.