Приобретенная апластическая анемия (ПАА) - жизнеугрожаемое орфанное заболевание, обусловленное возникшим дефектом стволовой клетки или ее микроокружения, приводящим к уменьшению или отсутствию продукции гемопоэтических клеток, жировому замещению костного мозга и как следствие, к панцитопении в периферической крови. Частота встречаемости ПАА - 1-3 случая на 1 млн детского населения.

Основными методами лечения ПАА являются трансплантация гемопоэтической стволовой клетки от HLA-идентичного родственного донора, а при его отсутствии - иммуносупрессивная терапия (ИСТ).

Цель исследования - разработка протокола применения аллогенных мезенхимальных стволовых клеток (МСК) для усиления ИСТ и репарации стромы костного мозга при комплексном лечении апластической анемии у детей, а также изучение функционального состояния гемопоэтических и негемопоэтических стволовых клеток костного мозга пациентов с ПАА.

Материалом для исследования особенностей пролиферативной активности клеток-предшественников гемопоэза у пациентов детского возраста с ПАА послужили 58 образцов костного мозга.

У 93 % пациентов с тяжелой формой ПАА инициальный уровень (при постановке диагноза) колониеобразующих единиц КОЕ-ГМ и БОЕ-Э был значительно ниже нормы. Исследование стромы костного мозга выявило значительное снижение содержания в нем активно пролиферирующих МСК в группе детей с ПАА по сравнению со здоровыми. В эксперименте in vitro установлено отсутствие положительного поддерживающего эффекта МСК из костного мозга детей с ПАА на пролиферацию ГСК, тогда как МСК из костного мозга доноров увеличивали число гемопоэтических клеток в 2,8 раза (p = 0,04). Выявлено, что МСК, полученные из костного мозга детей с ПАА на момент постановки диагноза, имеют повышенный адипогенный потенциал по сравнению с МСК из костного мозга здоровых детей (р = 0,0001).Также было установлено иммуносупрессирующее действие МСК на цитотоксические CD3+CD8+ и активированные CD3+HLA-DR+ лимфоциты, содержание которых в периферической крови пациентов, получивших биомедицинский клеточный продукт (БМКП) МСК, достоверно снижалось на 28, 64 и 112 дни после начала ИСТ (p<0,05) при отсутствии изменений в содержании этих популяций Т-лимфоцитов в группе лиц, лечившихся стандартной ИСТ. У пациентов с ПАА наблюдалось повышенное содержание TNFa и INFγ, которое снижалось до нормы на фоне клеточной терапии МСК на 112-й день (р<0,05), тогда как в группе стандартной ИСТ уровень цитокинов оставался выше нормы.

Нами проведено проспективное простое рандомизированное исследование эффективности введения БМКП МСК при проведении ИСТ. В него было включено 20 пациентов: 10 (группа сравнения) назначено лечение по стандартной схеме ИСТ без применения БМКП МСК (группа МСК-); 10 (исследуемая группа) введен аллогенный БМКП МСК для усиления иммуносупрессии, поддержки гемопоэза и повышения репарации стромы (группа МСК+). БМКП МСК брали из костного мозга здоровых доноров обоих полов в возрасте старше 18 лет, являвшихся родителями или родственниками детей с ПАА. Пациенты получили от 2,18 до 7,17 10⁶/кг МСК на 8-е и 31-й сут ИСТ. Группы были сопоставимы по демографическим, гематологическим, морфологическим и этиологическим параметрам.

Результаты исследования показали, что восстановление гемопоэза более интенсивно происходило у пациентов с ПАА, получивших БМКП МСК. Так, восстановление эритроидного ростка у 60 % группы МСК+ происходило к 112-му дню, они в 2 раза реже нуждались в заместительной терапии эритроцитами. Восстановление гранулоцитарного ростка также интенсивнее происходило у пациентов группы МСК+. Тромбоциты восстанавливались в более поздние сроки, к 180-му дню 60 % лиц группы МСК+ имели показатель более 50 000/мкл по сравнению с 30 % в группе МСК-. Пациенты, получившие МСК, реже нуждались в заместительной терапии тромбоцитами. На 180-й день ИСТ только в группе МСК+ имели место полный ответ на терапию, а его отсутствие в данный декретивный период чаще регистрировалось в группе.

Предложенный метод применения БМКП МСК для лечения приобретенной апластической анемии у детей является эффективным, так как кумулятивная частота полного гематологического ответа в группе пациентов, получивших МСК, составляет 85,5 %, что достоверно выше (рисунок), чем у лиц после стандартной ИСТ (30 %) (p<0,05).