Цель исследования - разработать методы оценки чувствительности-устойчивости планктонных и биопленочных культур бактерий-оппортунистов к антисептическим лекарственным средствам, применяемым в клинической практике для лечения местных гнойно-воспалительных заболеваний.

Сущность достижения - возможность оценки по единому принципу с применением ряда показателей чувствительности-устойчивости планктонных и биопленочных культур бактерий-оппортунистов к антисептическим лекарственным средствам, в т. ч. к комбинированным, содержащим несколько активно действующих веществ (АДВ), а также ранжирования различных антисептиков по степени противомикробной активности.

Оценку чувствительности-устойчивости планктонных бактериальных культур выполняли в 96-луночных пластиковых планшетах в триптиказо-соевом бульоне (ТСБ) с применением редокс-индикатора - 2,3,5-трифенил-тетразолия хлористого (ТТХ).

Суспензии исследуемых тест-культур, выращенных в течение 18-24 ч на скошенном мясопептонном агаре (МПА) при температуре 37 °С, готовили смыванием физиологическим раствором с последующей стандартизацией по МакФарланду до 9,0×10⁸ КОЕ/мл. Непосредственно в лунках планшета готовили двукратные последовательные разведения антисептических средств в ТСБ в объеме 150,0 мкл. В ряды лунок с разведениями антисептиков вносили по 30,0 мкл стандартизованной взвеси тест-культур. Планшеты закрывали крышками и помещали в термостат при 37 °С на 18-24 ч. После извлечения из термостата во все лунки вносили по 30,0 мкл 0,4 % водного раствора ТТХ с повторной инкубацией планшетов в термостате в течение 2-3 ч. Результаты учитывали по изменению цвета среды на красный.

Для оценки антимикробной активности лекарственных средств, в т. ч. имеющих сложный состав (содержащих комбинацию нескольких АДВ), вместо МИК (минимальной ингибирующей концентрации) предложено использовать основной, универсальный показатель МИР (максимальное ингибирующее разведение) - разведение антисептического средства от его исходной рабочей концентрации, при котором отмечается задержка роста тест-культуры.

Максимальное разведение антисептика, при котором не происходило изменение цвета, являлось максимальным ингибирующим разведением антисептика в отношении исследуемой тест-культуры.

В таблице 1 с применением ряда показателей представлены результаты оценки чувствительности-устойчивости выборки клинических изолятов S. aureus к различным антисептикам.

Таблица 1. - Чувствительность-устойчивость клинических изолятов S. aureus (n = 50) к антисептикам

Как следует из таблицы, значения МИР исследуемых антисептиков в отношении клинических изолятов S. aureus варьировали в значительной степени, что связано с неоднородностью популяции по признаку чувствительности-устойчивости. Наименьшее значение МИР антисептиков соответствовало МИР₁₀₀ для данной популяции бактерий. Величина МИР₁₀₀ зависела от вида антисептика и находилась в диапазоне 4-128. Исходя из значений МИР₁₀₀, наибольшую активность в отношении S. aureus проявляли фукорцин и бриллиантовый зеленый (МИР₁₀₀ = 128), а также хлоргексидин и мукосанин (МИР₁₀₀ = 64 и 32, соответственно) и значительно меньшую - септомирин, бетадин (МИР₁₀₀ = 8) и хиндиокс (МИР₁₀₀ = 4).

Значения МИР среднего, представленные в таблице, позволяют сравнить степень активности различных антисептиков в отношении исследованной популяции стафилококка при равных значениях МИР₁₀₀. Так, при одинаковых значениях МИР₁₀₀ фукорцина и бриллиантового зеленого (128 и 128), септомирина и бетадина (8 и 8) МИР среднее бриллиантового зеленого было значительно выше, чем фукорцина (278,2±17,10 против 205,1±8,56), а септомирина - выше, чем бетадина (29,4±0,82 против 17,1±1,73), что позволяет сделать вывод о более высокой степени антистафилококковой активности соответствующих антисептиков. В обоих случаях различия статистически значимы.

Определение чувствительности-устойчивости биопленочных бактериальных культур выполняли в 24-луночных пластиковых планшетах. Для формирования биопленок в лунки планшета вносили по 700,0 мкл ТСБ с последующим добавлением стандартизованных по МакФарланду до 9,0×10⁸ КОЕ/мл тест-культур бактерий. Планшеты инкубировали в термостате при 37 °С в течение 2 сут для формирования биопленок. После извлечения из термостата из лунок удаляли надосадочную среду и визуально убеждались в формировании биопленок на дне лунок. После этого в лунки вносили по 1000,0 мкл антисептика в разведениях 1:2-1:1024 в ТСБ. Планшеты повторно помещали в термостат на 1 сут. После извлечения из термостата из лунок аспирировали антисептик с последующим внесением в них по 1000,0 мкл ТСБ. Планшеты помещали в термостат на 2-3 ч, затем во все лунки вносили по 50,0 мкл 0,4 % ТТХ с последующей инкубацией планшетов в термостате в течение 2-3 ч. Результаты учитывали по изменению цвета среды. Окрашивание среды в красный цвет свидетельствовало о жизнеспособности бактерий в составе биопленки. В таблице 2 представлена сравнительная оценка чувствительности-устойчивости (МИР₁₀₀) планктонных и биопленочных культур S. aureus.

Установлено, что значения МИР₁₀₀ в отношении планктонных культур были значительно ниже, чем биопленочных. Значения индекса К (частное от деления МИР₁₀₀ планктонной культуры на МИР₁₀₀ биопленочной) составили 2-8. Наименьшие различия в чувствительности биопленочных и планктонных культур S. aureus отмечены для бетадина и септомирина (К = 2) (таблица 2).

Таблица 2. - Сравнительная оценка чувствительности-устойчивости (МИР₁₀₀) планктонных и биопленочных культур клинических штаммов S. aureus к антисептикам