Цель исследования - повысить эффективность оценки вероятности развития перитонеальной диссеминации (ПД) у радикально оперированных по поводу рака желудка пациентов.

Сущность достижения. В основе разработанного метода данные оценки риска развития метахронной ПД у радикально оперированных по поводу рака желудка пациентов по Каплан-Майеру на основании оценки статуса метилирования промоторного участка гена RECK в клеточном осадке перитонеальных смывов после лимфодиссекции (ЛД) и степени метастатического поражения регионарного лимфоколлектора (pN).

Новизна достижения заключается в разработке и оптимизации для конкретного клинического использования нового и ранее не применявшегося в Республике Беларусь и за ее пределами метода оценки вероятности развития перитонеальной диссеминации после радикального хирургического лечения рака желудка.

Количественные характеристики метода. Оценка эффективности разработанного метода выполнена на выборке из 97 пациентов, в возрасте от 32 до 73 лет (мужчин 59, женщин 38; средний возраст 56,6±8,2 года со степенью распространения опухолевого процесса: pT4a-bN2-3M0 - 45, pT4a-bN1M0 - 12, pT4a-bN0M0 - 22, pT1-3N0-3M0 - 18. Биологическим материалом для молекулярно-генетических исследований явились фрагменты свежезамороженной (нативной) и фиксированной в 10 % нейтральном формалине и залитой в парафин опухолевой ткани желудка, взятые во время оперативного вмешательства, а также смывы с брюшины, полученные путем введения в верхний этаж брюшной полости 50 мл физиологического раствора и его аспирации.

Статус метилирования промоторных участков генов RECK и Reprimo определялся методом метилспецифичной ПЦР. Общую фракцию геномной ДНК из смывов и парафинизированной опухолевой ткани выделяли наборами реагентов «QIAamp DNA Mini Kit» (Qiagen, США) и «QIAamp® DNA FFRE Tissue Kit» (Qiagen, США) соответственно. Постановку реакции бисульфитной конверсии выполняли с использованием тест-системы «EpiTect Bisulfite Kit» (Qiagen, США) с последующей амплификацией продуктов на приборе «С1000 Touch Thermal Cycler: CFX96» (BioRad, США). Для разделения полученных продуктов использовали 2 % агарозный гель.

Медиана наблюдения для пациентов с ремиссией заболевания составила 872 дня; до прогрессирования - 271 день; до развития ПД - 245 дней; для пациентов, умерших от прогрессирования опухолевого процесса - 470 дней.

При метилировании гена RECK в клеточном осадке смывов и/или метастатическом поражении регионарного лимфоколлектора (pN3), что соответствует наличию 7 и более метастазов в регионарных лимфатических узлах, вероятность развития метахронной ПД составила в сроки 1 год - 48±7 %, 2 года - 55±7 %, 3 года - 59±8 %, что было определено как высокий риск развития ПД; в случае отсутствия метилирования гена RECK в клеточном осадке смыва и pN0-2 вероятность ПД составила 14±6, 17±7 и 21±7 % соответственно (стандартный риск ее развития). Для использования способа применим следующий алгоритм: 1 этап - оценивается статус метилирования промоторного участка гена RECK в клеточном осадке перитонеальных смывов после завершения ЛД: положительный статус свидетельствует о высоком риске развития имплантационных метастазов. Отсутствие метилирования требует оценки степени метастатического поражения регионарного лимфоколлектора (pN) (этап 2): а) при pN3 имеет место высокий риск развития канцероматоза, что не требует дополнительных исследований; б) при отсутствии метастазов в регионарных лимфатических узлах или наличии метастазов в 1-6 регионарных лимфатических узлах (pN0-2) - стандартный риск развития ПД.

Преимущества по сравнению с отечественными и зарубежными аналогами. Чувствительность описанного способа прогнозирования составила 78,8 %, специфичность - 59,6 %, диагностическая точность - 67,1 %, информативность (площадь под ROC-кривой) - 0,73 (95 % ДИ 0,62-0,83).

В настоящее время в литературе описаны количественные прогностические маркеры, позволяющие определить лечебную тактику при синхронном перитонеальном канцероматозе, но не позволяющие прогнозировать развитие метахронной ПД в отдаленные сроки после радикального хирургического лечения РЖ [Harmon R. L., Sugarbaker P. H., 2005]. Описан ряд способов прогнозирования, основанных на биологических особенностях аденокарциномы конкретного пациента, однако результаты их применения неоднозначны. Для повышения точности прогнозирования Y. Yonemura et al., (2001) были изучены возможности использования определения в перитонеальной жидкости экспрессии мРНК гена ММР-7 (Matrix Metalloproteinase-7>). Чувствительность прогнозирования канцероматоза при использовании стандартного цитологического анализа составила 46 %, при определении экспрессии ММР-7 в смывах из брюшной полости - 33 %, комбинация же обоих методов позволила увеличить чувствительность до 61 %. C.-H. Jeon et al. (2014) для прогнозирования диссеминации использовали экспрессию мРНК гена MAGE (Melanoma-Associated Gene). Частота экспрессии MAGE и CEA составила 32,5 и 9,4 % соответственно, при опухолях pT4 экспрессия мРНК CEA была обнаружена в 31,8 % случаев (7/22), мРНК MAGE - в 68,1 % образцов (15/22). Несколько лучшие результаты были получены K. Miyagawa et al. (2008) при оценке экспрессии мРНК гена RegIV (Regenerating gene type IV) - чувствительность и специфичность составили 93 и 93 %, в то время как для CEA те же показатели были 73 и 91 % соответственно.

Таким образом, использование предложенного метода оценки риска ПД позволяет выделить среди радикально оперированных по поводу рака желудка пациентов группу, имеющую высокую вероятность развития данного варианта прогрессирования и дифференцированно подойти к планированию диспансерного наблюдения и адъювантного лечения. Разработанная модель обладает высокой прогностической точностью в сравнении с существующими аналогами.

Вид патентной защиты: в ходе выполнения НИР получен патент на изобретение НЦИС Республики Беларусь "Способ оценки риска развития перитонеальной диссеминации после радикального хирургического лечения рака желудка" № 22668.