Цель исследования - повысить эффективность лечения пациентов с меланомой кожи на основе выявления молекулярно-генетического профиля патологической экспрессии микроРНК.

Сущность достижения. Разработанный метод позволяет выделить группу пациентов с прогностически неблагоприятными формами меланомы кожи по уровню экспрессии панели микроРНК путем сравнения их с диагностическими критериями высокого метастатического потенциала.

Новизна достижения. Впервые в Республике Беларусь изучен спектр экспрессии микроРНК и определены пороговые значения, соответствующие клинически значимым уровням, что позволяет оценить прогноз заболевания и выбрать оптимальную тактику лечения, основанную на использовании молекулярно-генетических характеристик опухоли при меланоме кожи. Кроме того, характер экспрессии панели микроРНК (микроРНК-182, микроРНК-221, микроРНК-222, микроРНК-214, микроРНК-21, микроРНК-200b, микроРНК-15b) является предиктором чувствительности к цитостатической терапии с использованием дакарбазина/дакарбазин-содержащих схем.

Количественные характеристики метода. С целью выявления панели микроРНК, ассоциированной с прогностически неблагоприятными формами меланомы кожи, сформированы 2 группы лиц. В группу сравнения включены данные о 31 радикально прооперированном пациенте с I-II стадией заболевания без его признаков прогрессирования в течение не менее 2-х лет. Основная группа представлена 36 случаями метастатических форм заболевания, в т. ч. после хирургического вмешательства.

В ходе молекулярно-генетических исследований установлен диапазон уровней экспрессии (dCt) тестируемой панели микроРНК, которые варьировали от -4,99 до 14,64 отн. ед. и от -3,12 до 14,78 отн. ед. в группе сравнения и основной группе соответственно.

Оценка взаимосвязи клинико-морфологических параметров и экспрессии панели микроРНК проведена с помощью двустороннего теста Манна-Уитни (р_mu) с дополнительным многофакторным регрессионным и корреляционным анализом. Установлена статистически значимая обратная корреляция микроРНК-15b, микроРНК-21, микроРНК-181, микроРНК-221 и микроРНК-222 с клинической стадией, уровнем инвазии, толщиной и клеточным типом опухоли, наличием изъязвления и ангиотропизма, митотическим индексом; статистически значимая прямая корреляция микроРНК-182 и микроРНК-200b с клинической стадией и статусом регионарных лимфатических узлов.

Для выявления прогностически неблагоприятных уровней экспрессии микроРНК проанализирована беспрогрессивная выживаемость в обеих группах с использованием метода Каплана-Майера и сравнения полученных кривых лог-ранк тестом (p_lr). Для расчета показателей чувствительности и специфичности тестов при установленном пороговом значении использовали ROC-анализ.

На основании исследования удалось определить перечень факторов неблагоприятного прогноза меланомы после радикального лечения, который включает: толщину опухоли более 4 мм (p<0,01), IV-V уровни инвазии (p<0,01), наличие изъязвления (p<0,01), смешанный клеточный тип (p<0,01); уровень экспрессии микроРНК-21 ниже -0,98 отн. ед. (p<0,01), микроРНК-181 ниже 5,82 отн. ед. (p<0,01), микроРНК-182 выше 11,31 отн. ед. (p<0,01), микроРНК-200b выше 7,11 отн. ед. (p<0,01), микроРНК-214 выше 5,77 отн. ед. (p<0,05).

Согласно разработанным критериям прогностический профиль экспрессии микроРНК оценен в 53 биологических образцах пациентов с метастатической меланомой кожи. Из числа обследованных у 17 (32,1 %) выявлен прогностически неблагоприятный уровень экспрессии микроРНК-21. Экспрессия микроРНК-181 ниже порогового значения определена в 24 (45,3 %) случаях. Сверхэкспрессия микроРНК-182 присутствовала в 26 (49,1 %) биологических образцах. Показатели плохого прогноза для микроРНК-200b отмечены у 27 (50,9 %) обследованных. В наибольшем количестве случаев (41, 77,4 % установлены надпороговые уровни микроРНК-214.

Для определения предиктивной значимости экспрессии микроРНК в оценке чувствительности к системной терапии (дакарбазин и дакарбазин-содержащие режимы химиотерапии) проанализировано 49 образцов опухолевой ткани пациентов с метастатическими формами меланомы. Для оценки взаимосвязи характера ответа на лекарственную терапию и экспрессии протестированной панели микроРНК использована бинарная логистическая регрессия. С целью определения оптимального порогового значения уровня экспрессии микроРНК и расчета показателей чувствительности и специфичности тестов при установленном пороговом значении выполнен ROC-анализ.

По результатам исследований и анализа полученных данных в качестве критериев лекарственной устойчивости при химиотерапии дакарбазином и дакарбазин-содержащими режимами у пациентов с метастатической меланомой кожи предложено рассматривать любой из указанных признаков:

сочетание уровня экспрессии микроРНК-21 выше 0,42 отн. ед., микроРНК-200b выше 9,69 отн. ед. и микроРНК-221 выше 5,14 отн. ед. (чувствительность - 78,1 %, специфичность - 58,8 %, AUC - 0,708);

сочетание уровня экспрессии микроРНК-21 выше 0,42 отн. ед. и микроРНК-200b выше 9,69 отн. ед. (чувствительность - 81,3 %, специфичность - 52,9 %, AUC - 0,678);

сочетание уровня экспрессии микроРНК-21 выше 0,42 отн. ед. и микроРНК-221 выше 5,14 отн. ед. (чувствительность - 81,3%, специфичность - 56,5%, AUC - 0,708);

уровень экспрессии микроРНК-21 выше 0,42 отн. ед. (чувствительность - 75,0 %, специфичность - 55,6 %, AUC - 0,672).

Преимущества по сравнению с отечественными и зарубежными аналогами. Разработанный метод не имеет отечественных аналогов.

Диагностическая чувствительность метода определения молекулярно-генетического профиля патологической экспрессии микроРНК составляет 99,9 %, что соответствует уровню лучшего мирового аналога. Высокий показатель достигается за счет оптимизации технологии полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, а также нормализации экспрессии микроРНК относительно выбранного референсного гена.

Чувствительность разработанного метода прогнозирования чувствительности опухолевых клеток меланомы кожи к дакарбазину составляет 90 %, что соответствует показателю лучшего мирового аналога (90 %).

Вид патентной защиты: патенты на изобретения НЦИС Республики Беларусь.