Терапия стволовыми клетками представляет собой многообещающий альтернативный подход к лечению эпилепсии, принципиально отличающийся от противосудорожной лекарственной терапии и электростимуляции, которые направлены на устранение симптомов, а не основных причин эпилепсии.

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) костного мозга обладают рядом преимуществ для подготовки аутологичного биомедицинского продукта: доступность источника получения, высокий пролиферативный потенциал, пластичность дифференцировки клеток под действием индукторов, отсутствие иммуногенности. Одним из лимитирующих факторов клинического применения МСК является достаточность их количества для иммуномодулирующих (противовоспалительных) или заместительных целей.

Цель исследования - разработать методики получения трансплантатов аутологичных МСК для лечения фармакорезистентной эпилепсии.

Сущность достижения и его новизна. Подготовлена методика для получения биомедицинского клеточного продукта (БМКП) аутологичных МСК для курсовой терапии. В рамках подготовки МСК от пациентов в 1/3 случаев получали количество клеток МСК, достаточное для первого и повторного курса терапии (при условии криохранения МСК). На курс лечения требуется не менее 35,0*10⁶ МСК и не менее 5,0*10⁶ нейроиндуцированных МСК.

Аутологичную культуру МСК получали из костного мозга пациентов ГУ «Республиканский научно-практический центр психического здоровья» с фармакорезистентной формой эпилепсии и культивировали in vitro в полной питательной среде на основе альфа-МЕМ с добавлением 1 % глютамакса и 5 % сыворотки АВ(IV) человека, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Необходимая клеточность БМКП для внутривенного введения (в среднем - 1,08±0,06 млн/кг веса пациента) достигалась в течение 2 пассажей и составляла от 39,5 до 120,0 млн МСК. Для нейрогенной дифференцировки производили культивирование клеток 2-го пассажа в среде на основе KnockOut DMEM/F12, содержащей культуральную добавку Neural Supplement (2 %), глютамакс (1 %), FGFb (20 нг/мл), EGF (20 нг/мл). Культивирование нейроиндуцируемых клеток (5,0-10,0 млн) осуществляли в течение 5-7 дней. Нейрогенную дифференцировку клеток подтверждали молекулярно-генетическим методом (ОТ-ПЦР). Маркерами были выбраны гены: нейронспецифическая енолаза (NSE), нестин (NES) и ассоциированный с микротрубочками белок 2 (map2). Нормализация образцов производилась с использованием конститутивных маркеров COMT и PGK. При нейрогенной дифференцировке в культуре МСК достоверно увеличивался уровень экспрессии исследованных генов (Eno2 в среднем в полученных образцах клеток в 2,07±0,17 раза, NES - 9,35±3,5 раза, Map2 - 3,34±0,44 раза). Таким образом, экспрессия нейронспецифических маркеров указывает на индукцию МСК костного мозга пациентов в нейрогенном направлении.

Распределение МСК по экспрессии ключевых поверхностных маркеров соответствовало критериям Международной ассоциации по клеточной терапии (ISCT) (CD90⁺, CD105⁺ - не менее 95 %; CD45-, CD34- - не более 5 %).

Полученные образцы МСК были введены пациентам внутривенно и через 5-7 дней (нейроиндуцированные МСК) - эндолюмбально при жизнеспособности клеток не менее 95 %. Реакций на введение клеток 15 пациентов, в т. ч. 14 - при двух повторных курсах лечения, не наблюдали.