Цель исследования - определить взаимосвязь эффективности действия цитостатических лекарственных средств на опухолевые клетки взрослых пациентов с острыми лейкозами in vitro с исходом заболевания.

В настоящее время актуальным остается вопрос о прогнозировании исхода заболевания в условиях применения химиотерапии, в том числе высокодозной (ВХТ), на основе определения in vitro диапазона устойчивости лейкозных клеток к лекарственным средствам. Решение этого вопроса повысит клиническую эффективность терапии острых лейкозов за счет снижения ее токсичности, а также стоимости терапии вследствие рационального использования дорогостоящих лекарственных средств и объективизации критериев выбора тактики ведения пациентов.

Таким образом, выбор прогностических подходов и критериев позволит в определенной степени персонифицировать терапию, улучшить результаты лечения, повысить его эффективность и относительную безопасность, а также увеличить продолжительность жизни пациентов или даже излечить их.

В ходе исследований установлено, что на основании определения диапазона устойчивости опухолевых клеток и характеристики ответа на повышающуюся дозу терапевтического воздействия можно прогнозировать целесообразность проведения высокодозной химиотерапии, что в свою очередь позволит добиться ремиссии и затем предупредить появление рецидива (в случае правомерного применения ВХТ) либо предотвратить неэффективность назначения высоких доз лекарственных средств и соответствующих неблагоприятных эффектов (в случае отказа от ВХТ). Исследование носит экспериментальный характер и подтверждает клинические результаты использования лекарственных средств.

Исследовали образцы лимфоцитов периферической крови 55 пациентов с острым лейкозом гематологических отделений ГУ «Минский научно-практический центр хирургии, трансплантологии и гематологии». В статье представлены данные об образцах 14 пациентов из отчета о предварительных клинических испытаниях метода (персонифицированный подход к пациентам, не ответившим на первую «стандартную» линию терапии). Выделение лимфоцитов периферической крови производили согласно стандартной методике путем наслоения цельной крови на градиент фиколл-верографина. Выделенные лимфоциты культивировали в среде RPMI-1640 (Sigma, США) с добавлением 10 % фетальной телячьей сыворотки (ФТС), 2 мM L-глутамина (Sigma, США), 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37 °С во влажной атмосфере с 5 % СО₂. Для определения чувствительности лимфоциты культивировали с такими лекарственными средствами, как флударабел, циклофосфамид, преднизолон, винкристин, доксорубицин, рубомицин, цитарабин и этопозид. Данные лекарственные средства применялись в конечных концентрациях в лунке, диапазон которых был близок к терапевтическим и превышающим терапевтические в 2 раза:

флударабел - 5 и 10 мкг/мл; циклофосфамид - 200 и 400 мкг/мл; преднизолон - 30 и 60 мкг/мл; винкристин - 0,25 и 0,5 мкг/мл; доксорубицин - 0,5 и 1,0 мкг/мл; рубомицин - 0,2 и 0,4 мкг/мл; цитарабин - 5,0 и 10,0 мкг/мл; этопозид - 20 и 40 мкг/мл.

Чувствительность лимфоцитов периферической крови к химическим воздействиям определяли с помощью теста (МТТ), основанного на способности живых клеток перерабатывать 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромид в формазан.

С целью выявления зависимости исхода заболевания от чувствительности опухолевых клеток in vitro пациенты были разделены на 2 группы:

1) пациенты, вышедшие в ремиссию; 2) пациенты с летальным исходом.

Для каждого пациента из этих 2-х групп лекарственные средства были условно разделены на 2 подгруппы в зависимости от чувствительности к ним опухолевых клеток:

1) выживаемость клеток до 50 %; 2) выживаемость клеток выше 50 %.

На основании анализа частоты применения лекарственных средств с высокой противоопухолевой эффективностью в группе с ремиссией и лекарственных средств с низкой противоопухолевой эффективностью в группе с летальным исходом исследовалась зависимость между количеством лекарственных средств с высокой/низкой противоопухолевой эффективностью и исходом заболевания.

В результате было выявлено, что в группе пациентов, вышедших в ремиссию заболевания, не обнаружено достоверных различий (p>0,05) в чувствительности клеток к лекарственным средствам, которые были разделены на подгруппы высокой и низкой противоопухолевой эффективности (рисунок 1).

Рисунок 1. – Соотношение лекарственных средств с высокой и низкой противоопухолевой эффективностью в группе пациентов, вышедших в ремиссию, в зависимости от чувствительности клеток к этим лекарственным средствам

При этом установлено, что в группе пациентов с летальным исходом наблюдалась высокая резистентность опухолевых клеток и как следствие, больший удельный вес лекарственных средств с низкой противоопухолевой эффективностью (69,6 % лекарственных средств с низкой противоопухолевой эффективностью против 30,4 % с высокой противоопухолевой эффективностью в этой же группе лиц) (p<0,05) в сравнении с группой пациентов, вышедших в ремиссию заболевания (55,1 против 44,9 % соответственно в этой же группе пациентов) (p>0,05) (рисунок 2).

Рисунок 2. – Соотношение лекарственных средств с высокой и низкой противоопухолевой эффективностью в группе пациентов с летальным исходом в зависимости от чувствительности клеток к этим лекарственным средствам

Таким образом, нами показана корреляция резистентности лейкозных клеток пациентов с острым лейкозом к лекарственным средствам in vitro с низкой прогностической значимостью и возможным летальным исходом, что подтверждает высокую гетерогенность и индивидуальную чувствительность пациентов к химиотерапии и необходимость корректировки протоколов лечения, в т. ч. и применения ВХТ, что будет способствовать индивидуализации типовой терапии лейкозов.