УДК: 57.063.8:616.91-074/078(047.31)(476)
Год издания: 2019

Разработка поливалентной диагностической тест-системы для выявления антител к разным серотипам возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом

Семижон П.А.Счесленок Е.П.Владыко А.С.Школина Т.В.Фомина Е.Г.Григорьева Е.Е.Дубков Н.А.
Рубрики: 34.15.3134.25.0576.03.41
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: «Провести молекулярно-эпидемиологический мониторинг геморрагической лихорадки с почечным синдромом на территории Республики Беларусь и разработать поливалентную диагностическую тест-систему для выявления антител к разным серотипам возбудителя заболевания».
Сроки выполнения НИР: I кв. 2016 г. — IV кв. 2018 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук, проф. А. С. Владыко.
Источник финансирования: госбюджет.

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) относится к природно-очаговым зоонозным инфекциям. Заболеваемость ГЛПС в Республике Беларусь регистрируется ежегодно: в соответствии с данными по инфекционной заболеваемости в 2017 г. было зарегистрировано 66 случаев ГЛПС, что составляет 0,70 случая на 100 тыс. населения, в 2018 г. - 62 /0,66 случая на 100 тыс. населения, в 2019 г. (по данным за январь-апрель) зарегистрировано 20/0,21 случая на 100 тыс. населения.

Источником инфицирования человека являются мелкие млекопитающие, главным образом дикие и синантропные грызуны - хронические носители хантавирусов. Инфицирование человека происходит преимущественно воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем при контакте с выделениями (слюна, моча, экскременты) грызунов.

Основными возбудителями ГЛПС, циркулирующими в Европейском регионе, являются хантавирусы Puumala (доминирующий), Dobrava, Hantaan и Seul, относящиеся к семейству Bunyaviridae. В Республике Беларусь, как и в большинстве стран Европы, где регистрируется ГЛПС, доминирует вирус Puumala, основным носителем которого является рыжая полевка (Сlethrionomys glareolus). По результатам исследований в настоящее время на территории Республики Беларусь достоверно установлена циркуляция двух представителей хантавирусов, вызывающих ГЛПС - Puumala и Dobrava. В связи с этим актуальным является разработка и регистрация в системе здравоохранения Республики Беларусь диагностической тест-системы, позволяющей одновременно выявлять антитела к основным серотипам возбудителей ГЛПС (Puumala, Dobrava, Hantaan), с целью последующего использования в лабораторной диагностике для верификации диагноза.

Цель исследования - разработка диагностической тест-системы, позволяющей выявлять антитела ко всем серотипам хантавирусов, циркулирующих на территории Республики Беларусь.

Основу разработанной тест-системы составляют рекомбинантные антигены, включающие антигензначимые участки нуклеокапсидных белков вирусов Puumala, Dobrava, Hantaan. Для определения дизайна антигенов выполняли биоинформационный анализ структуры нуклеокапсида вирусов-возбудителей ГЛПС как основного вирусного антигена, регистрируемого уже в начале заболевания, на который, по имеющимся данным литературы, отмечается наиболее интенсивный гуморальный иммунный ответ. Для этого были использованы открытые интернет-ресурсы - UniProtКВ, Immune Epitope Database and Analysis Resource, а также авторская компьютерная программа wxGeneBee, разработанная российско-белорусскими программистами. По результатам анализа были установлены аминокислотные последовательности нуклеокапсидных белков, включающие антигенные детерминанты и являющиеся потенциальными участками связывания специфических антител. На последующих этапах исследования с использованием молекулярно-биологических методов (обратная транскрипция, полимеразная цепная реакция, молекулярное клонирование и биосинтез чужеродных белков) были экспрессированы соответствующие рекомбинантные полипептиды в прокариотической системе E.coli, штамм BL21 (DE3). Рекомбинантные полипептиды были очищены от содержания посторонних клеточных белков с использованием метода аффинной металлохелатной хроматографии. Антигенные свойства полученных полипептидов оценивали методами иммунного блоттинга (ИБ) и твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). В качестве анализируемого материала были использованы референс-сыворотки крови человека, содержащие специфические антитела к вирусам Puumala, Dobrava, Hantaan (получены из референс-лаборатории Федерального научного центра исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М.П. Чумакова РАН, Российская Федерация) и сыворотки крови человека, не содержащие специфических антител. По результатам постановки ТИФА и ИБ было установлено, что полученные рекомбинантные белки проявляли выраженные антигенные свойства - специфически связывали соответствующие антитела, присутствующие в сыворотке крови и в то же время, не взаимодействовали с компонентами нормальной человеческой сыворотки. Данные результаты позволили использовать полученные рекомбинантные полипептиды вирусов Puumala, Dobrava, Hantaan в качестве основных антигенных компонентов для разработки диагностической тест-системы.

Изделие медицинского назначения «Реагенты для иммуноферментного анализа. Тест-система для выявления антител классов М и G к вирусам Пуумала, Добрава, Хантаан» «ИФА-Пуум-Доб-Хант-IgM/IgG», ТУ BY 100558032.405-2018 зарегистрировано на территории Республики Беларусь (рег. уд. № ИМ-7.107136 от 06.12.2018), внесено в Государственный реестр медицинской техники и изделий медицинского назначения Республики Беларусь. Тест-система предназначена для выявления антител классов М и G к хантавирусам у пациентов с подозрением на заболевание геморрагической лихорадкой с почечным синдромом методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа.


Область применения: лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: в клинико-диагностических лабораториях инфекционных стационаров, лабораториях диагностики особо опасных инфекций Республиканского и областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья, иных учреждениях, осуществляющих диагностику ГЛПС.
Предложения по сотрудничеству: выпуск и реализация диагностической тест-системы по разовым договорам, а также в рамках централизованных закупок для организаций здравоохранения.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2022 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта