Программа глобальной эрадикации полиомиелита достигла огромных успехов в борьбе с этим тяжелым заболеванием и в настоящее время находится на заключительной стадии своего выполнения. В 2015 г. была сертифицирована эрадикация дикого полиовируса серотипа 2, и с 2016 г. живой вакцинный штамм этого серотипа более не используется для рутинной иммунизации. Дикий полиовирус серотипа 3 также не встречается нигде в мире уже более 10 лет. Тем не менее, в мире ежегодно регистрируются десятки случаев паралитического полиомиелита, вызванные диким полиовирусом серотипа 1, а также нейровирулентными дериватами вакцинных штаммов, т. н. вакцинородственными полиовирусами всех трех известных серотипов. Для минимизации риска распространения полиовирусов требуется как поддержание высокого уровня охвата вакцинацией, так и обеспечение всеми странами качественного эпидемиологического надзора за полиовирусной инфекцией.

Цель исследования - разработать и внедрить алгоритм ускоренной идентификации вирусов полиомиелита, соответствующий современным международным стандартам, и провести молекулярно-эпидемиологический мониторинг полиовирусной инфекции.

В результате выполнения проекта разработан алгоритм ускоренной детекции и идентификации полиовирусов с использованием молекулярных методов, основу которого составил комплекс реакций ОТ-ПЦР с флюоресцентно-гибридизационной детекцией в режиме реального времени, направленных на одновременную детекцию в образце панэнтеровирусов, панполиовирусов и при их наличии идентификацию полиовирусов серотипа 1 и 3 (инструкция по применению «Алгоритм ускоренной детекции и идентификации полиовирусов с использованием молекулярных методов», регистрационный № 001-0419, утверждена 23.04.2019). Состав 3 реакционных смесей отличается только набором используемых праймеров и зонда, для всех реакций применяется единый режим амплификации, что позволяет проводить их одномоментно и по окончании сделать заключение о наличии/отсутствии и типе полиовируса.

Исследованию подлежат цитопатогенные агенты, полученные при пассировании биологического материала от пациентов или проб из окружающей среды. Ранее проводимые в Беларуси исследования полиовирусов включали серологическую идентификацию изолятов в реакции нейтрализации в культуре клеток с использованием типоспецифических сывороток и внутритиповую дифференциацию выделенных полиовирусов (дифференциация диких и вакцинных штаммов) с использованием ОТ-ПЦР-ПДРФ-анализа (двухстадийная ПЦР с последующей ферментативной рестрикцией фрагментов ДНК и анализом в агарозном геле). Внедрение молекулярного типирования позволило ликвидировать зависимость от наличия гипериммунных сывороток к полиовирусам, которые в Беларуси не производятся, и сократить время исследования на 70 %, с 7 до 2 дней.

С использованием разработанных методов проведен молекулярно-эпидемиологический мониторинг полиовирусной инфекции в Беларуси. При вирусологическом обследовании в 2016-2018 гг. 170 пациентов с синдромом острого вялого паралича (полиомиелитоподобное заболевание) в одном случае был изолирован полиовирус серотипа 3, в трех - неполио-энтеровирусы (Echo 6, Coxsackie B2, Coxsackie B5), в четырех - аденовирусы. Полиовирус серотипа 3 был изолирован от ребенка, привитого оральной полиовакциной в России до прибытия в Беларусь, и по молекулярно-генетической характеристике являлся вакцинным. Динамическое наблюдение показало отсутствие связи между вакцинацией и заболеванием ребенка. На основании клинико-лабораторных данных все 170 случаев острого вялого паралича были классифицированы как паралитические заболевания неполиомиелитной природы.

При молекулярной и серологической идентификации 238 цитопатогенных агентов, полученных в рамках надзора за полиомиелитом в 2016-2018 гг. во всех регионах страны и доставленных в национальный референс-центр по полиомиелиту, установлено, что 10,9 % образцов содержали полиовирусы, 38,6 % - неполиоэнтеровирусы, 40,8 % - аденовирусы и оставшиеся 9,7 % - кишечные вирусы, не относящиеся к энтеро- или аденовирусам.

Полиовирусы были представлены 29 изолятами, в т. ч. 10 относились к серотипу 1; 9 - серотипу 2; 10 - серотипу 3. Основная доля полиовирусов - 65,5 % (19 из 29 штаммов) была выделена до мая 2016 г., т. е. в период применения в стране живой оральной полиовакцины (с мая 2016 г. вакцинация против полиомиелита в Беларуси осуществляется только инактивированной полиовакциной). По результатам молекулярно-генетического исследования все эти вирусы являлись вакцинными. Во второй половине 2016 г., 2017 и 2018 гг. было выделено 3, 2 и 5 штаммов полиовирусов соответственно, которые также во всех случаях являлись вакцинными и, вероятнее всего, были завезены в Беларусь недавно привитыми лицами из стран, где продолжается использование живой полиовакцины (в число которых входят Россия и Украина). Диких и вакцинородственных штаммов на территории Беларуси не зарегистрировано. Доля неполио-энтеровирусов, выделенных в рамках надзора за полиомиелитом, возросла с 21,8 % в 2016 г. до 49,2 % в 2017 г. и 52,6 % в 2018 г. (р = 0,001).