Цель исследования - иммуногистохимическое исследование (ИГХИ) гигантоклеточной опухоли (ГКО) кости на предмет выявления клеточного состава, а также определения потенциала агрессивности различных форм ГКО.

В основе исследования лежит комплексное изучение, включающее гистологические и иммуногистохимические методы, а также анализ клинических и радиологических данных. Материалом для патоморфологического исследования послужили удаленные ткани опухоли. Гистологические срезы окрашивались гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону. ИГХИ выполняли с первичными антителами к vimentin, Osteonectin, Ki-67, CD68, CD31, CD34, CD5, CD20, CD45, CD68, CD79а и CD138.

Обработка полученных результатов проводилась статистическими методами. Были применены статистические методы сравнения средних (t-критерий Стьюдента), дисперсий и стандартных отклонений (F-критерий Фишера) и медиан (W-критерий Манна-Уитни). Взаимосвязь между показателями определялась методом непараметрического двустороннего коэффициента корреляции Спирмена (ρ). Достоверность различий между показателями устанавливалась с помощью двустороннего непараметрического метода Манна-Уитни.

Учитывая морфогенез опухоли, состоящей из 3-х клеточных элементов, нами был применен ряд первичных антител, покрывающий различные линии клеточных дифференцировок, в т. ч. мезенхимального и гематогенного происхождения клеток. При ИГХИ образцов ткани опухоли с vimentin выявляется, что во всех анализируемых случаях практически все виды клеток опухоли имели иммунопозитивную реакцию. Выраженная экспрессия vimentin в ГКО, с одной стороны, объясняет мезенхимальный генез всех клеточных элементов, входящих в состав этой опухоли, и с другой - иммунопозитивная окраска с vimentin может быть использована как положительный контроль ИГХИ при ГКО. Анализ экспрессии макрофагального маркера CD68 в операционном материале ГКО показывает иммунопозитивную окраску с макрофагами и гигантоклеточными элементами опухоли. Макрофаги обычно имеют полигональную или неправильную форму. В опухолевой клеточной массе они распределены неравномерно. При окраске с CD68 можно определить количество, размер и распределение гигантских клеток. При этом отмечаются неровные зазубренные края цитоплазматических мембран гигантских многоядерных клеток, что в свою очередь указывает на сходство их с остеокластами. ИГХИ образцов ткани ГКО с помощью osteonectin четко показывает наличие иммунопозитивных клеток краевых и внутриостеоидных остеобластов. Также нами обнаружены отдельные и групповые остеонектин-положительные клетки в составе клеточных масс ГКО. Остеонектин-положительная реакция выявляет наличие остеобластических клеток и тем самым указывает на остеогенетическое происхождение данных опухолей. ИГХИ на предмет пролиферативной активности стромальных опухолевых клеток с Ki-67 показало более интенсивное ядерное окрашивание в анализируемых случаях со злокачественными формами ГКО по сравнению с доброкачественными. Выявляется корреляция между индексом пролиферативной активности и агрессивностью течения при различных формах ГКО. При этом отмечается, что распределение иммунопозитивных пролиферирующих клеток в ГКО неравномерное. В опухоли определяются очаги с повышенной пролиферативной активностью опухолевых клеток - горячие точки. Также мы наблюдали, что при инфильтрирующей форме роста ГКО в участках опухоли с экстраоссальным распространением в надкостницу или за ее пределы опухолевые клетки обладают более выраженной пролиферативной активностью - инвазивные фронты опухоли. В анализируемых образцах ИГХИ с антителами CD5 (маркер T-клеток), CD20 и CD79a (маркеры В-клеток), CD45 (маркер общего лейкоцитарного ряда) и CD138 (маркер плазматических клеток) показало слабую иммунопозитивную реакцию. Распределение лимфоцитарных иммунопозитивных клеток в опухолевой клеточной массе диффузное и неравномерное. Также определяются мелкие очаги скопления иммунопозитивных клеток с тенденцией к формированию лимфоидных фолликулов и очаги периваскулярной локализации иммунопозитивных клеток.

Таким образом, ИГХИ показало свою эффективность для выявления вида клеточного состава ГКО и дифференциальной диагностики различных форм ГКО. Оно как дополнительный инструмент может указать на потенциал агрессивности опухоли. Данный метод дает представление о фенотипе и распределении клеточного состава ГКО, необходимое для понимания биологического поведения различных форм ГКО кости. С помощью ИГХИ не только четко определяется мезенхимальный генез всех клеточных элементов ГКО, но и доказывается остеобластическое происхождение опухоли. ГКО состоит из 3-х различных клеточных групп: стромальные фибробластоподобные клетки, мононуклеарные гематогенные клетки и мультинуклеарные гигантские клетки. Истинно опухолевыми клетками в гетерогенной клеточной массе ГКО являются стромальные фибробластоподобные клетки. Они происходят из плюрипотентных стволовых стромальных клеток. По своей биологической природе одноядерные стромальные клетки подобны фибро- и остеобластам. Тесные гистогенетические взаимоотношения одноядерных клеток и остеобластов подтверждаются тем, что среди одноядерных клеток вариабельно выявляются очаги костеобразования. Скопления остеоида и молодых костных балочек можно обнаружить во многих наблюдениях. ГКО обладает высокой остеобластической и остеокластической активностью. Процессы остеогенеза и остеолизиса в ней происходят синхронно и перманентно. Количественное определение остеобластов с помощью оsteonectin наряду с тканевым, межуточным и клеточным атипизмом может дать полезную информацию для дифференциальной диагностики между добро- и злокачественными формами ГКО. Выявление индекса пролиферативной активности с Ki-67 бесспорно позволяет получить важнейшие данные о злокачественном потенциале ГКО. Стромальные опухолевые клетки имеют более выраженную пролиферативную активность в злокачественных формах ГКО по сравнению с доброкачественными. С помощью Ki-67 можно установить горячие точки и инвазивные фронты опухоли, что дает возможность определить биологическое поведение и прогноз ГКО. Иммуногистохимическое фенотипирование воспалительной инфильтрации с выявлением B- и T-лимфоцитов указывает на одновременное действие гуморального и клеточного иммунитета против стромальных опухолевых клеток. Полученные данные могут служить дополнительным инструментом дифференциальной диагностики добро- и злокачественных форм ГКО.

Интерпретация полученных иммуногистохимических данных и их статистическая обработка на предмет выявления корреляции между клинико-инструментальными, патоморфологическими и иммуногистохимическими характеристиками имеет огромное значение для понимания природы данной опухоли и для дифференциальной диагностики добро- и злокачественной форм ГКО.

Вид патентной защиты: инструкция по применению: регистрационный № 210-1-12/8; патентовладелец: государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии».