Проведены исследования, направленные на разработку отечественной технологии приготовления диагностикума для обнаружения антител к белкам ВИЧ-1 в сыворотке крови методом иммунного блоттинга (ИБ) для подтверждения диагноза “ВИЧ-инфекция”. Основу диагностикума составлял нативный лизат, полученный из ВИЧ-инфицированных Т-лимфобластоидных клеточных линий. В работе использовались высокорепликативные штаммы ВИЧ-1 high/rapid типа. Установлено, что продукция ВИЧ-1 и степень его накопления в культуральной среде зависят от используемой клеточной линии и штамма вируса.

С целью более полноценной очистки белков в процессе приготовления диагностикума были изучены условия культивирования ВИЧ-1 при низком (не выше 2,5%) содержании эмбриональной сыворотки. Отработаны 2 схемы перевода ВИЧ-инфицированных клеток в такие условия: постепенный и одномоментный. Установлено, что невысокое содержание эмбриональной сыворотки приводит к снижению инфекционных титров вируса на 1-3 lg ТЦД50. В то же время одномоментный перевод клеток в такие условия с последующим развитием в них острой ВИЧ-инфекции оказался более предпочтительным по сравнению с постепенной адаптацией ВИЧ-инфицированных клеток к низкому содержанию эмбриональной сыворотки в среде.

После концентрирования и очистки вируса и проведения электрофореза в приготовленных образцах установлено присутствие 7 вирусоспецифических белков ВИЧ-1 с молекулярными массами 17, 24, 31, 40, 41, 55/53 и 65 кДа. После переноса фракционированных белков ВИЧ-1 на нитроцеллюлозную мембрану сконструированный диагностикум проверяли на иммунологическую реактивность путем проведения ИБ с сыворотками ВИЧ-инфицированных пациентов с полным спектром антител к белкам ВИЧ-1. Выявлено, что исследуемые сыворотки специфически связывались с белками р17, р24 и р55/53 (ген GAG), p31 (ген POL) и р41 (ENV), которые имеют диагностическое значение при ВИЧ-инфекции.

Таким образом, отработаны условия для приготовления отечественной ИБ-тест-системы, подтверждающей ВИЧ-инфекцию. Созданы 3 экспериментальные серии диагностикума для проведения комиссионных испытаний и подготовлена соответствующая научно-техническая документация.