УДК: 577.\51.042:577.34
Год издания: 1998

УЧАСТИЕ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА В ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ РЕАКЦИЯХ

Пыжова Н.С.Никандров В.Н.
Рубрики: 76.03.31

Тема НИР: “Кислородзависимый протеолиз (пути реализации кислородзависимого протеолиза на молекулярном уровне и в культуре клеток)”.
Сроки выполнения НИР: 1992 - 1995 гг.
Научный руководитель: д-р биол. наук, проф. В.Н. Никандров.

Методом ингибиторного анализа с использованием перехватчиков различных форм активного кислорода (синглетного, гидроксильного, супероксидного, H202) впервые показана возможность участия этих форм в каталитической функции металлопротеинаэ Staphylococcus aureus, Вас. subtilis, яда змеи, a-амилаз из Bac.subtilis и поджелудочной железы. Чувствительность указанных энзимов к различным перехватчикам позволяет считать, что наиболее вероятно участие в каталитической функции гидролаз супероксидного радикала и H202. Исследование кинетики ингибирования протеолитического действия пепсина на сывороточный альбумин одним из перехватчиков супероксидного радикала - адреналином - выявило ингибирование по неконкурентному механизму. Это согласуется с авторской гипотезой участия активных форм кислорода в каталитической функции протеиназ.

В системе NADH-феназинметосульфат и в тесте автоокисления пирогаллола впервые обнаружена супероксиддисмутазоподобная способность пепсина и трипсина, в отличие от стрептокиназы не зависящая от концентрации в системе нуклеотида. В случае пепсина эта способность практически полностью снижается добавками (10-3 М) диэтилдитиокарбамата, ЭДТА, 8-оксихинолина, а в присутствии 8М мочевины - и ферроцианида калия. Супероксиддисмутазоподобная способность трипсина чувствительна ко всем комплексонам, включая о-фенантролин. В стандартной тестовой системе супероксидконвергирующая способность пепсина или трипсина уступает таковой истинной Си, Zn-супероксиддисмутазы на 3 порядка.

Впервые показано, что обработка химотрипсиногена А перекисью водорода, химическими системами генерирования супероксидного радикала или ионами двухвалентного железа (10-4-10-5 М) вызывает частичную активацию зимогена.

Установлено, что субклеточные фракции (ядерная, митохондриальная, “тяжелых мембран”) печени и головного мозга мышей способны активировать плазминоген человека как связанный с нитями фибрина, так и растворимый. Эта способность в различной степени (в зависимости от фракции и органа) усиливается добавками экзогенного NADH. Она подавляется в присутствии нитротетразолиевого синего, а в ряде случаев усиливается цианидом и арсенатом.

Возможность активации плазминогена добавками ионов экзогенного трехвалентного железа, а также активация протеолиза в присутствии неорганического ортофосфата продемонстрирована в ряде перевиваемых линий лимфобластов человека.

Представленные данные развивают авторскую гипотезу кислородзависимых реакций протеолиза, что в перспективе позволит переосмыслить механизм реакций энзиматического гидролиза. В ряде медико-биологических наук могут быть и практические приложения в виде обоснования путей коррекции активности протеиназ, амилаз, активации зимогенов в биологических субстратах, разработки нетрадиционных ингибиторов протеолиза и дифференциально-диагностических тестов.


Область применения: энзимология, лабораторная диагностика, фармация.
Рекомендации по использованию: полученные данные целесообразно включить в курс лекций по биохимии.
Предложения по сотрудничеству: совместные исследования с НИИ НАНБ, зарубежными центрами.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2019 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта