Цель исследования - разработка стратегии профилактики РТПХ, основанной на удалении иммунокомпетентного пула Т-лимфоцитов из донорского трансплантата.

Моделью острой РТПХ служила общепринятая методика аллотрансплантации костного мозга линейных мышей, отличающихся по Н-2 локусу гистосовместимости. Т-деплеция проводилась разработанным нами методом иммуномагнитосепарации с предварительной инкубацией костного мозга (КМ) с магнитными полистироловыми микросферами, конъюгированными с моноклональными антителами ИКО-10 фирмы “Диагнотех” (Москва) к антигену Thy 1 мыши. Подготовительный режим реципиентов включал тотальное облучение тела (ТОТ) g-лучами в дозе 10 Гр.

Проведены серии опытов по сравнению степени приживления неочищенного (ТНКМ) и элиминированного (ТОКМ) трансплантатов. В качестве прогноза развития РТПХ и контроля реактивности донорского КМ использовали метод смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ). В процессе мониторинга в посттрансплантационный период определяли уровень аутоантител у реципиентов к Т-лимфоцитам донора, а также гематологические и биохимические показатели системы гомеостаза. Проводили морфологическую оценку степени выраженности РТПХ.

Во всех группах животных отмечали приживление трансплантата. Среднее время восстановления числа лейкоцитов > 0,5х10⁶/л было достигнуто на 20-е сутки (10-30) при ТНКМ и на 21-е сутки (12-30) при ТОКМ. Число тромбоцитов восстанавливалось до уровня > 20х10⁹/л в среднем за 24 дня (19-29) при ТНКМ, за 27 дней (22-32) при ТОКМ. Количество лимфоцитов у реципиентов, получивших очищенный костный мозг, было достоверно ниже, чем при ТНКМ и составляло на 5-10-е сутки 8,4-29,3% против 24,0-53,3%.

В реакции СКЛ было показано, что лимфоциты селезенок мышей, которым трансплантировали очищенный КМ, не реагируют на антигены спленоцитов мышей линии F1, СВА и BALB/c. Отсутствие у реципиентов ТОКМ стимуляции лимфоцитов на антигены донора, особенно в сравнении с достоверным повышением уровня стимуляции их при ТНКМ, указывает на высокую степень очистки донорского КМ от Т-лимфоцитов на магнитном сепараторе.

Уровень аутоантител у реципиентов к Т-лимфоцитам доноров на 5-е сутки в обеих сериях был одинаков. Однако на 15-25-е сутки в серии ТОКМ наблюдалось достоверно резкое падение уровня Ig реципиента к Т-лимфоцитам донора по сравнению с серией ТНКМ, где уровень Ig возрос в 2,3 раза от первоначального.

Было установлено, что при трансплантации неочищенного костного мозга имеет место выраженное (р < 0,005) повышение уровня сывороточных креатинина (на 400 и 200% соответственно) и аспарагинаминотрансферазы (на 82 и 44% соответственно) по сравнению с таковыми у реципиентов, получивших очищенный от Т-лимфоцитов костный мозг. Указанное повышение отмечается, начиная с 5-х суток и продолжается в течение всего периода наблюдения, что совпадает с началом патоморфологических изменений в тканях реципиентов при трансплантации неочищенного костного мозга.

В печени вокруг центральных вен появлялись зоны дистрофии и некроза, по всему органу отмечались многочисленные небольшие лимфоидные инфильтраты. В почке отмечались явления амилоидоза значительной части клубочков с пролиферацией эпителиоцитов наружного листка капсулы клубочка. В желудке наблюдались явления некроза и отторжения слизистой оболочки, такие же изменения были отмечены в тонком кишечнике. В эпидермисе уха при отсутствии митозов увеличивалось содержание апоптозных кератиноцитов в базальном слое, в сосочковом слое дермы встречались моно- и полинуклеарные инфильтраты. В селезенке наряду с массивным амилоидозом красной пульпы и некоторых центральных артерий встречались зоны с плазматизацией пульпарных тяжей и усиленным гранулоцитопоэзом. В белой пульпе происходило относительное нарастание бластных клеток в части фолликулов, в других же фолликулах отмечалось снижение цитоза. Аллотрансплантация элиминированного костного мозга не вызывает выраженных изменений биохимических показателей. Морфологические проявления РТПХ в этой серии опытов выражены незначительно, что соответствует I-II степени тяжести РТПХ.

Таким образом, Т-деплеция донорского костного мозга, проводимая методом иммуномагнитосепарации с помощью иммуномагнитомикросфер, предотвращает развитие острой РТПХ у реципиентов и не увеличивает сроки приживления трансплантата.