|
УДК: 616-07:061.62
Год издания: 1999
РАЗРАБОТКА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ЛИМФОЦИТАРНОГО ХОРИОМЕНИНГИТА НА ОСНОВЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА
Владыко А.С., Фомин И.К., Зайцева В.Н.
Рубрики: 76.03.41, 76.35.33
Тема НИР: “Разработка современных тест-систем для диагностики клещевого энцефалита, лимфоцитарного хориоменингита, СПИДа. Получение рекомбинантного антигена вируса ЛХМ”.
Сроки выполнения НИР: январь 1996 г. - декабрь 1998 г.
Научный руководитель: д-р мед. наук А.С. Владыко.
Наряду с традиционными методами получения антигенов большое значение в настоящее время придается использованию биотехнологических подходов, позволяющих получать антигены искусственным путем, что является не только экономически выгодным, но и исключает необходимость непосредственного контакта с возбудителями инфекций.
Целью настоящей работы являлась апробация в качестве антигена с помощью ТИФА рекомбинантного пептида вируса ЛХМ, полученного экспрессией в E.coli небольшого фрагмента S-сегмента, кодирующего иммунодоминантный В-эпитоп в белке нуклеокапсида вируса. Для сравнения был использован нативный препарат вируса ЛХМ (метод ТИФА).
В качестве антител использовали референс-положительную и референс-отрицательную сыворотки; сыворотки, положительные к вирусу ЛХМ и тестированные в лаборатории ранее, и сыворотки доноров из БелНИИГиПК.
Из 45 изученных образцов сывороток с рекомбинантными антигенами 41 был идентичен нативному препарату, что соответствует 91,1% специфичности.
Что касается чувствительности, то следует отметить, что несмотря на использование неочищенных рекомбинантных антигенов (при равных условиях сенсибилизации панелей нативным и рекомбинантным антигенами вируса ЛХМ) титры референс-положительных сывороток с рекомбинантными антигенами оказались примерно в 10-20 раз выше, чем с нативным. В связи с этим для нативного антигена сенсибилизирующая доза была оптимальной при сорбции 0,1 мкг белка в лунку, а для рекомбинантного - 0,01.
Таким образом, рекомбинантный антиген вируса ЛХМ не уступает по чувствительности и специфичности нативному и может быть использован для серодиагностики ЛХМ методом ТИФА.
Полученные данные легли в основу разработки и апробации диагностической рекомбинантной иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусу ЛХМ.
Область применения: клиническая и лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: препарат может применяться для выявления антител к вирусу ЛХМ с помощью ТИФА в диагностических лабораториях ЛПУ РБ.
Предложения по сотрудничеству: экспериментальное производство тест-системы и поставка препарата в центры гигиены и эпидемиологии.