УДК: 616. 612.1/.42:621.928.8
Год издания: 1999

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕТОДА ИММУНОМАГНИТНОЙ СЕПАРАЦИИ В-ЛИМФОЦИТОВ ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДОНОРОВ

Колина С.В.
Рубрики: 76.03.5576.29.33

Тема НИР: “Завершить разработку способа профилактики реакции трансплантат-против-хозяина (РТПХ) при аллотрансплантации костного мозга и способа выделения В-лимфоцитов для типирования доноров”.
Сроки выполнения НИР: IV кв. 1998 г. - IV кв. 1999 г.
Научный руководитель: чл.-кор. НАНБ, проф. О.-Я.Л. Бекиш, д-р мед. наук Г.Я. Хулуп.

Цель работы - сравнительное изучение выделения В-лимфоцитов (CD20 ± ) из периферической крови 50 доноров с использованием полистироловых иммуномагнитных микросфер (ИММС) и лабораторного магнитного сепаратора “БЕЛСЕП-Л05”. В качестве конъюгата к микросферам использовали моноклональные антитела (МКАТ) ICO-180 (в рабочем разведении) и концентрированные МКАТ ICO-180с (НПО Мед-БиоСпектр, Москва). Поверхность магниточувствительных микросфер из полистирола активировали 12%-ным раствором паратолуолсульфонилхлорида. Последующую конъюгацию микросфер с МКАТ проводили из расчета на 1мг микросфер (по сухому остатку) 0,02 мг МКАТ (по белку). Экспериментально подобранные условия (лимфоциты периферической крови, выделенные на градиенте плотности, в концентрации 8-9 млн/мл, соотношение клетка-микросфера 1:10, объем суспензии клеток 2,0 ± 0,2 мл, инкубация смеси при 4°С в течение 30 минут) позволяют проводить связывание необходимого количества клеток-мишеней. Разделение розетированных комплексов происходило в постоянном магнитном поле (индукция 0,125 Тл). Величину выделенных В-лимфоцитов определяли как разность между количеством выделенных клеток в суспензии мононуклеаров и в супернатанте (ICO-180, меченные FITC). Параллельно проводили подсчет розетированных комплексов (ИММС + В-лимфоцит) в камере Горяева; процент живых клеток выявляли по исключению трипанового синего. Положительно связанными считали клетки, присоединившие не менее 3 микросфер. Как показали проведенные исследования, чистота выделения В-лимфоцитов при использовании ИММС (коммерческие МКАТ в рабочем разведении) составила 81,2 ± 1,3%, а при использовании концентрированных МКАТ - 96,6 ± 2,6%. Количество живых клеток было не менее 96,7 ± 2,1%. На основании собственной методики выявлено, что В-лимфоциты (CD20 ±) составляют 11,6 ± 1,7%. Результаты полученных данных находятся в прямой корреляции с такими показателями, как специфичность связывания, чистота сепарации клеток, что доказывает их адекватность.


Область применения: онкогематология, лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: метод может применяться в клинико-лабораторной практике для выделения и типирования клеток-мишеней.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь при внедрении.


в начало med.by баннеры учреждения авторы расширенный поиск
Достижения медицинской науки Беларуси.
Copyright © 1997-2024 НИО РНМБ
Вопросы и комментарии просьба отправлять Администратору сайта