Цель работы - создание доступного для применения в лабораторной практике количественного метода оценки динамики роста Mycobacterium tuberculosis (МБТ) в жидкой питательной среде.

Разработан колориметрический микрометод, основанный на способности живых клеток редуцировать 3-[4,5-диметил-2-тиазолил]-2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ) до пурпурного формазана. Показано, что МТТ-тест может использоваться для определения количества, жизнеспособности и скорости роста МБТ в жидкой питательной среде. Были определены следующие оптимальные параметры: концентрация МТТ в реакционной системе, время инкубации MБТ с МТТ, режим экстрагирования формазана, а также исходная концентрация МБТ для оценки динамики роста микобактерий в жидкой питательной среде. В результате эксперимента с серийными 10-кратными разведениями исходной суспензии МБТ с использованием этих параметров была создана калибровочная кривая, позволяющая определять концентрацию клеток микобактерий в исследуемом образце по оптической плотности редуцированного МТТ. Наличие линейной зависимости между оптической плотностью и количеством клеток микобактерий в суспензии концентрацией свыше 10⁶ кл/мл позволяет использовать данный метод в эксперименте. Было показано, что рост контрольной суспензии МБТ, оцениваемый с помощью колориметрического метода, характеризуется неодинаковой метаболической активностью на разных фазах жизненного цикла. В первые сутки инкубации (лаг-фаза) наблюдается незначительное повышение кислородного метаболизма. В дальнейшем происходит значительное повышение, коррелирующее с приростом числа живых бактериальных клеток. К 8-м суткам инкубации в контрольной серии наблюдается максимальная оптическая плотность редуцированного МТТ, что следует соотносить с наибольшим количеством живых бактериальных клеток в суспензии.

Полученные данные свидетельствуют о высокой точности и воспроизводимости МТТ-теста. Преимуществом разработанного метода является использование малых количеств исследуемых агентов и питательных сред, поскольку инкубирование культуры микобактерий проводится в малом объеме (200 мкл), отсутствие необходимости в специальном оборудовании и питательных средах, а также возможность статистической обработки данных.