УДК: 579.873.21:579.253
Год издания: 1999
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МТТ-ТЕСТА ДЛЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ АНТИМИКОБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ АНТИБИОТИКОВ
Залуцкая О.М.
Рубрики: 76.29.53
Тема НИР: “Разработать ускоренный метод определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis”.
Сроки выполнения НИР: январь 1997 г. - декабрь 1999 г.
Научный руководитель: канд. мед. наук Д.В. Печковский.
Целью исследования было изучение бактерицидной активности новых антибиотиков - аминогликозидного (нетилмицин, «Shering-Plough») и макролидного (спирамицин, «Rhone-Poulenc Rorer»), а также препаратов липосомального рифампицина с различным диаметром липосом в отношении Mycobacterium tuberculosis (МБТ) в жидкой питательной среде на основе способности живых клеток редуцировать 3-[4,5-диметил-2-тиазолил]-2,5-дифенилтетразолий бромид до пурпурного формазана (МТТ-тест).
Суспензию чувствительного ко всем противотуберкулезным препаратам штамма МБТ «Академия» концентрацией 106 кл/мл в жидкой среде Middlebrook 7Н9 инкубировали в присутствии нетилмицина концентрацией от 0,15 до 50,0 мкг/мл, спирамицина концентрацией от 6,25 до 200,0 мкг/мл, а также препаратов липосомального рифампицина концентрацией 20,0 мкг/мл при 37°С. Рост МБТ оценивали с помощью МТТ-теста в исходной суспензии на 1, 5, 8 и 11-е сутки инкубации. Было показано ингибирующее рост МБТ действие нетилмицина в концентрациях 6,0 мкг/мл и выше. Минимальная ингибирующая концентрация нетилмицина в отношении МБТ составила 12,5 мкг/мл. В отличие от нетилмицина спирамицин не оказывал бактерицидного действия в отношении МБТ. Было отмечено бактериостатическое действие спирамицина концентрацией 200,0 мкг/мл в отношении МБТ с 5-х суток инкубации и концентрацией 25,0 и 100,0 мкг/мл на 11-е сутки. Минимальная ингибирующая концентрация спирамицина в отношении МБТ в указанном выше градиенте концентраций определена не была. Было показано, что ингибирующее рост МБТ действие препаратов липосомального рифампицина проявляется уже со вторых суток инкубирования. Бактериоскопическое исследование суспензий микобактерий по Цилю - Нельсену выявило различия в количестве и морфологии микобактериальных клеток, инкубированных в присутствии антибиотиков в действующих и не оказывающих действия концентрациях.
Таким образом, в результате проведенных исследований была показана высокая точность, воспроизводимость МТТ-теста и возможность использования его в лабораторной практике для изучения антимикобактериальной активности новых антибиотиков.
Область применения: фтизиатрия, микробиология.
Рекомендации по использованию: метод может быть внедрен в бактериологических лабораториях противотуберкулезных диспансеров.
Предложения по сотрудничеству: консультативная помощь при внедрении.